B59380–AD
98 of 135
RIKNEMISE TUNNUSED
Muutused reagentide välimuses võivad viidata riknemisele ja reagenti ei tohi kasutada.
Kui pakend on kahjustatud või saadud andmed näitavad muutusi toimivuses, võtke ühendust kohaliku
edasimüüjaga või kasutage järgmist meiliaadressi:
VAJALIKUD, KUID KOMPLEKTI MITTE KUULUVAD MATERJALID:
•
Proovide võtmiseks vajalikud proovikatsutid ja materjalid.
•
Ühekordselt kasutatavate otsadega 10, 20, 100 ja 1000 µl automaatpipetid.
•
Hemolüüsi plastkatsutid.
•
Kalibreerimisgraanulid: Flow-Set Fluorospheres (viitenr 6607007).
•
Spetsiifilised fluorestsentsi antikehad.
•
Isotüüp-kontrollid.
•
Puhver (PBS: 0,01 M naatriumfosfaat; 0,145 naatriumkloriid; pH 7,2).
•
Kinnitusreagent: näiteks IOTest 3 fiksaatorlahus (viitenr A07800).
•
Tsentrifuug.
•
Automaatne segur (keerisetüüpi).
•
Läbivoolu tsütomeeter.
PROTSEDUUR VERSALYSE'I REAKTIIVIGA
Märkus. Allolevad protseduurid kehtivad standardrakenduste puhul. Proovi ja/või VersaLyse'i mahud võivad
konkreetse Beckman Coulteri rakenduse puhul erineda. Sellisel juhul järgige rakenduse tehnilisi juhiseid.
A – protseduur kaasneva fikseerimiseta
Reagendi ettevalmistamine
Ettevalmistamine ei ole vajalik. Kasutage VersaLyse'i otse viaalist.
Iga analüüsitud proovi kohta on lisaks proovikatsutile vaja kontrollkatsutit, milles lisatakse verelibledele
konkreetsele valitud värvainele vastav isotüüp-kontroll.
1. Lisage igasse proovikatsutisse antikehade hulk, mida soovitab tootja, et värvida 5 × 10
5
leukotsüüti.
2. Lisage igasse kontrollkatsutisse isotüüp-kontrolli hulk, mida soovitab tootja, et värvida 5 × 10
5
leukotsüüti.
3. Lisage mõlemasse katsutisse 100 µl proovi (eellahjendatud või mitte). Keerutage katsuteid ettevaatlikult.
4. Inkubeerige, järgides kasutatud antikehade tehnilistes juhistes toodud tingimusi.
5. Lisage 1 ml VersaLyse'i ja keerutage kohe 1 sekundi jooksul.
6. Inkubeerige vähemalt 10 minutit toatemperatuuril (18–25 °C) valguse eest kaitstult.
Kui protseduur ei näe ette pesemist, on katsutid valmis tsütomeetriliseks analüüsiks.
NB! Kui valmissegusid peab pesema, ärge analüüsige neid enne etappide 7 kuni 11 läbimist.
7. Tsentrifuugige toatemperatuuril 5 minutit 150 × g juures.
OLULINE! On täheldatud, et kui kasutatakse kaasneva fikseerimiseta protseduuri, milles on pesemisetapp,
võivad tekkida vereliblede dubletid, mida nimetatakse n-ö põgenikeks. See võib põhjustada valesid tulemusi,
kuna valguse hajumise omadused muutuvad ja vereliblede dubletid põgenevad lüüsimispiirkondadest välja
(6)
. Aktiivne keerutamine võib neid dublette lõhestada.
8. Eemaldage aspireerimisega ülemine vedelikukiht.
9. Suspendeerige uuesti vereliblede graanuleid 3 ml PBS-is.
10. Tsentrifuugige toatemperatuuril 5 minutit 150 × g juures.
11. Eemaldage aspireerimisega ülemine vedelikukiht ja suspendeerige uuesti vereliblede graanuleid:
•
0,5 ml või 1 ml PBS-i ja 0,1% formaldehüüdi, kui preparaate tuleb hoida vähem kui 24 tundi.
(0,1%
formaldehüüdi PBS-i saamiseks tuleb lahjendada 12,5 µl IOTest 3 fiksaatorlahust (REF A07800) ja selle 10×
kontsentratsiooni 1 ml PBS-is).
•
0,5 ml või 1 ml formaldehüüdita PBS-iga, kui valmissegusid analüüsitakse 2 tunni jooksul.