B59380–AD
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Especificações
Solução de Lise pronta a usar
Formulação
Liquido
Volume
100 mL
Numero de frascos
1 frasco
Volume por teste
1 mL (pronto a usar com o procedimento sem fixação concomitante)
VersaLyse
Solução para lise
1 mL / teste, A09777 100 testes; 100
mL
Para fins de diagnóstico
in vitro
UTILIZAÇÃO PREVISTA
Este reagente utiliza-se para a lise dos glóbulos vermelhos, na preparação das amostras biológicas a ser
analisadas com citometria de fluxo. VersaLyse é compatível com todos os tipos de citómetros e é utilizado com
ou sem lavagem depois da incubação e si anticorpos fluorescentes, adequadamente calibrados, são utilizados
no protocolo. VersaLyse também é utilizado para tratar amostras que tenham sido previamente lavadas para
eliminar as imunoglobulinas séricas, por exemplo (1,2,3,4,5)..
PRINCÍPIO
A amostra que contem os glóbulos vermelhos é exposta ao reagente VersaLyse por pelo menos 10 minutos. O
principal constituinte activo do VersaLyse é uma amina cíclica, a qual em contacto com a anidrase carbónica
presente nos glóbulos vermelhos é transformada num composto que é altamente lítico para estas células.
Este reagente é utilizado com anticorpos conjugados específicos, capazes de unir-se aos leucócitos devido ao
antigénio determinante por eles expressos. A coloração específica dos leucócitos é adquirida por incubação da
amostra com o anticorpo ou anticorpos. Os glóbulos vermelhos são removidos por lise e os leucócitos, que não
são afectados por este processo, são analisados com citometria de fluxo.
As preparações devem ser conservadas entre 2 e 8 °C e analisadas rapidamente utilizando a citometria de fluxo.
No caso de ocorrer algum retardo de varias horas antes da analise, as preparações podem ser fixadas com PBS
contendo 0,1% de formaldeido (consultar as técnicas do folheto relativas à Solução de Fixação IOTest 3– Ref.
A07800 – para preparar o PBS com 0,1% de formaldeido). Neste caso requer-se de uma lavagem previa.
O citómetro mede a difusão de luz e a fluorescência das células. Possibilita a delimitação da população de
interesse na janela electronica definida pelo histograma, a qual correlaciona a difusão ortogonal da luz (Side
Scatter ou SS) e a difusão dum estreito ângulo de luz (Forward Scatter ou FS). Outros histogramas que juntam
dois dos diferentes parâmetros disponíveis no citómetro podem também ser usados como ajuda dependendo da
aplicação escolhida pelo utilizador.
A fluorescência das células delimitadas é analisada para distinguir os eventos corados positivamente dos não
corados. Os resultados são expressos como a percentagem de eventos positivos em relação a todos os eventos
adquiridos pela aquisição electrónica.
AVISOS E PRECAUÇÕES
1. Não use o reagente após a data de expiração.
2. Não refrigere no refrigerador, não congele .
3. Minimize a exposição à luz durante a etapa de incubação com os anticorpos fluorescentes.
4. Evite a contaminação microbiana dos reagentes, podem obter-se falsos resultados.
5. O formaldeido é tóxico e alergénico. Também pode ser carcinogénico. Nunca pipetar com a boca e evitar
qualquer contacto das amostras com a pele, mucosa e olhos.
6. Todas as amostras de sangue devem ser consideradas como potencialmente infecciosas e devem ser
manipuladas com cuidado (em particular: uso de luvas, fatos e óculos).
7. Os tubos de sangue e qualquer material descartável usado na manipulação, deve ser descartado num frasco
especial fechado para incineração.