B59380–AD
74 of 135
Specifikace
Lyzační roztok VersaLyse, připravený k použití
Forma
Roztok
Díl
100 ml
Počet lahviček
1 lahvička
Objem / test
1 ml (v metodě bez fixace připraveno k přímému použití)
VersaLyse
Lyzující roztok
1 ml / test, A09777 100 testů; 100 ml
Pro použití při diagnostice
in vitro
URČENÉ POUŽITÍ
Reagencie je určena k lýze červených krvinek v biologických vzorcích připravovaných pro analýzu průtokovým
cytometrem. VersaLyse je možné používat na všech typech průtokových cytometrů v technikách s promýváním
i bez promývání vzorku po inkubaci, za předpokladu použití řádně kalibrovaných fluorescenčně značených
protilátek. VersaLyse také umožňuje zpracovat vzorky, které již byly v předchozím zpracování promyty, např. z
důvodu odstranění sérových imunoglobulinů (1,2,3,4,5).
PRINCIP
Vzorek obsahující červené krvinky, jež mají být lyzovány, je vystaven minimálně na 10 minut působení roztoku
VersaLyse. Hlavní aktivní složkou roztoku VersaLyse je cyklický amin, který je kontaktem s karbonát dehydratázou
červených krvinek přeměněn na sloučeninu velmi účinně lyzující erytrocyty.
Tato reagencie se používá v kombinaci se specifickými konjugovanými protilátkami, jež jsou schopny vázat se na
antigenní determinanty exprimované na leukocytech. Specifického označení leukocytů protilátkami je dosaženo
během inkubace vzorku s protilátkou (protilátkami). Červené krvinky jsou ze vzorku odstraněny lýzou a leukocyty,
které lýzou nejsou ovlivněny, jsou analyzovány průtokovým cytometrem.
Připravené vzorky musí být skladovány při teplotě 2 až 8 °C a rychle analyzovány průtokovým cytometrem. V
případě několikahodinového prodlení před analýzou je lze fixovat v PBS obsahujícím 0,1 % formaldehyd (návod,
jak připravit PBS s 0,1 % formaldehydem – viz příbalový leták fixačního roztoku IOTest 3 – Ref. A07800). V tomto
případě je promytí vzorku před analýzou nezbytné.
Průtokový cytometr měří rozptyl světla a fluorescenci buněk. Podle těchto parametrů jsou buňky lokalizovány uvnitř
elektronicky vytvořeného okna definovaného histogramem, který koreluje kolmý rozptyl světla ("Side Scatter", SS)
a rozptyl světla v malém úhlu ("Forward Scatter", FS). Další histogramy, kombinující dva různé parametry dostupné
na cytometru, je možné využít při elektronickém výběru populace buněk ("gatování") v závislosti na uživatelem
zvolené aplikaci.
Na základě fluorescence vybraných buněk, které dávají pozitivní signál, jsou odlišeny označené částice od
neoznačených. Výsledek je vyjádřen jako procentuální zastoupení pozitivních částic ve vztahu ke všem částicím
vybraným při elektronickém "gatování".
VAROVÁNÍ A OPATŘENÍ
1. Nepoužívejte reagencie s prošlým datem exspirace.
2. Neskladujte v chladničce, nezamrazujte.
3. Během inkubace s fluorescenčně značenými protilátkami omezte působení světla na minimum.
4. Vyvarujte se mikrobiální kontaminace reagencie, která může být příčinou chybných výsledků.
5. Formaldehyd je toxický a alergenní. Je považován za látku s karcinogenními účinky. Nikdy nepipetujte ústy
a vyvarujte se jakéhokoli kontaktu reagencie s pokožkou, sliznicemi, očima a oděvem.
6. Všechny krevní vzorky musí být považovány za potenciálně infekční a při zacházení snimi je třeba dodržovat
zásady bezpečnosti práce (zejména používat osobní ochranné pomůcky: rukavice, plášť a brýle).
7. Zkumavky s krví a použitý jednorázový materiál je třeba likvidovat spálením ve speciálních kontejnerech.