B59380–AD
70 of 135
Stężenie erytrocytów w próbce nie może przekraczać 6 x 10
6
/µL (6 x 10
12
/L), zaleca się rozcieńczenie próbki PBS
tak, by stężenie erytrocytów wynosiło 5 x 10
6
/µL.
Jeśli regulacji wymaga zarówno stężenie leukocytów jak i erytrocytów, należy zastosować większe z rozcieńczeń.
Procedury zakładają wykorzystanie 100 µL nierozcieńczanej lub rozcieńczonej wstępnie próbki na probówkę.
OZNAKA POGORSZENIA WŁAŚCIWOŚCI
Jakakolwiek zmiana w fizycznym wyglądzie odczynników może wskazywać na rozkład odczynnika i w związku z
tym niemożliwość jego użycia do badań.
W przypadku uszkodzenia paczki lub jeżeli opracowanie otrzymanych wyników sprawia trudności proszę się
kontaktować z miejscowym dystrybutorem lub pod adresem :
E-mail : [email protected]
MATERIAŁY POTRZEBNE, ALE NIE DOSTARCZONE W ZESTAWIE:
•
Probówki i materiały do pobierania próbek.
•
Pipety automatyczne z końcówkami jednorazowymi na 10 µL, 20 µL, 100 µL i 1000 µL.
•
Plastikowe probówki do hemolizy.
•
Kulki kalibracyjne: Flow-SetFluorospheres(Odn. 6607007).
•
Swoiste przeciwciała fluorescencyjne.
•
Kontrole izotypowe.
•
Bufor (PBS: 0,01 M fosforanu sodu, 0,145 M chlorku sodu, pH 7,2).
•
Utrwalacz: na przykład IOTest 3 Fixative Solution (Odn. A07800).
•
Wirówka.
•
Mikser automatyczny (typu Vortex).
•
Cytometr przepływowy.
PROCEDURA W PRZYPADKU ODCZYNNIKA VERSALYSE
Uwaga: Poniższe procedury obowiązują w standardowych zastosowaniach. Niektóre zastosowania Beckman
Coulter mogą wymagać innych objętości próbek i/lub odczynnika VersaLyse. W takim przypadku postępować
zgodnie z wytycznymi zamieszczonymi w instrukcji technicznej zastosowania.
A – Procedura bez równoczesnego utrwalania
Przygotowanie odczynnika
Nie jest konieczne żadne przygotowywanie. Użyj VersaLyse bezpośrednio z fiolki.
Dla każdej analizowanej próbki oprócz probówki testowej wymagana jest probówka kontrolna, w której do komórek
dodawana jest kontrola izotypowa odpowiadająca wybranemu swoistemu odczynowi.
1. Do każdej probówki testowej dodaj objętość przeciwciała zalecaną przez producenta wymaganą do
wybarwienia 5 x 10
5
leukocytów.
2. Do każdej probówki kontrolnej dodaj objętość kontroli izotypowej zalecaną przez producenta, wymaganą do
wybarwienia 5 x 10
5
leukocytów.
3. Dodaj po 100 µL próbki (rozcieńczonej lub nie) do obu probówek. Łagodnie wymieszaj probówki wytrząsarką
Vortex.
4. Inkubuj zgodnie z wymaganiami opisanymi w instrukcji stosowanych przeciwciał.
5. Dodaj 1 mL VersaLyse i natychmiast wymieszaj mikserem Vortex przez 1 sekundę.
6. Inkubuj przez przynajmniej 10 minut w temperaturze pokojowej (18 – 25°C), chroniąc przed światłem.
W przypadku procedury bez płukania, próbki są gotowe do automatycznej analizy.
UWAGA: Jeśli preparaty wymagają płukania, nie analizować przed wykonaniem kroków 7 do 11.
7. Wiruj przez 5 minut przy 150 x g w temperaturze pokojowej.
WAŻNE: Zauważono, że w przypadku stosowania procedury bez równoczesnego utrwalania i płukaniem,
mogą się tworzyć pary komórek, tz. uciekinierzy, czego skutkiem mogą być błędne wyniki wynikające ze
zmiany charakterystyki rozpraszania światła i faktu, że uciekają poza regiony bramkowania
(6)
. Intensywne
mieszanie mikserem Vortex może rozbić dublety.