B59380–AD
114 of 135
DOVADĂ DE DETERIORARE
Orice modificare a aspectului fizic al reactivilor poate indica degradarea. În acest caz, nu se recomandă utilizarea
reactivului.
În cazul în care ambalajul este deteriorat sau datele obținute indică unele modificări ale performanței, contactați
distribuitorul local sau utilizați următoarea adresă de e-mail:
[email protected]
MATERIALE NECESARE, DAR NEFURNIZATE CU SETUL:
• Eprubete pentru probe și materiale necesare pentru prelevarea probelor.
• Pipete automate cu vârfuri de unică folosință pentru 10, 20, 100 și 1000 µl.
• Eprubete din plastic pentru hemoliză.
• Granule de calibrare: fluorosfere Flow-Set (REF 6607007).
• Anticorpi fluorescenți specifici.
• Seruri de control izotipice.
• Soluție tampon (PBS: 0,01 M fosfat de sodiu; 0,145 M clorură de sodiu; pH 7,2).
• Reactiv de fixare: de exemplu soluție de fixare IOTest 3 (REF A07800).
• Centrifugă.
• Agitator automat (tip Vortex).
• Citometru de flux.
PROCEDURA CU REACTIVUL VERSALYSE
Observație: procedurile de mai jos sunt valabile pentru aplicații standard. Volumele de probe și/sau VersaLyse pentru
anumite aplicații Beckman Coulter pot fi diferite. Într-un astfel de caz, urmați instrucțiunile din prospectul tehnic al
aplicației.
A – Procedura fără fixare concomitentă
Pregătirea reactivului
Nu este necesară preparare. Utilizați reactivul VersaLyse direct din flacon.
Pentru fiecare probă analizată, în afară de eprubeta de testare, este necesară o eprubetă de control în care la celule se
adaugă controlul izotipic corespunzător colorării specifice selectate.
1. Adăugați în fiecare eprubetă cantitatea de anticorpi recomandată de către producător pentru colorarea a 5 x
10
5
leucocite.
2. Adăugați în fiecare eprubetă de control cantitatea de ser de control izotipic recomandată de către producător pentru
colorarea a 5 x 10
5
leucocite.
3. Adăugați 100 µl de probă (prediluată sau altfel) în ambele eprubete. Amestecați cu grijă eprubetele în agitatorul
vortex.
4. Incubați respectând condițiile specificate în prospectul tehnic pentru anticorpii utilizați.
5. Adăugați 1 ml de VersaLyse și agitați imediat cu vortex timp de 1 secundă.
6. Incubați timp de 10 minute la temperatura camerei (18°C–25°C) într-un loc ferit de lumină.
În cazul unei proceduri fără spălare, eprubetele sunt pregătite pentru analiza citometrică.
NB: dacă preparatele trebuie spălate, nu analizați înainte de a efectua pașii 7–11.
7. Centrifugați timp de 5 minute la 150 x g la temperatura camerei.
IMPORTANT: s-a observat că, atunci când se utilizează procedura cu fixare concomitentă și un pas de spălare, se
pot forma dublete celulare, denumite și evadate, existând posibilitatea generării unor rezultate eronate din cauza
modificării proprietăților lor de dispersie a luminii și a faptului că evadează din regiunile de gating
(6)
. O amestecare
energică cu agitatorul vortex poate perturba aceste dublete.
8. Îndepărtați supernatantul prin aspirare.
9. Resuspendați peleta de celule în 3 ml de PBS.
10. Centrifugați timp de 5 minute la 150 x g la temperatura camerei.
11. Îndepărtați supernatantul prin aspirare și resuspendați peleta de celule în: