B59380–AD
103 of 135
Bilo koja promjena u izgledu ovih reagensa može ukazivati na propadanje reagensa te se reagens ne smije koristiti.
U slučaju oštećenja pakiranja ili dobiveni podaci pokazuju promjedbe u izvedbi testa, molim kontaktirajte lokalnog
Beckman Coulter predstavnika ili pošaljite mail na:
POTREBNI MATERIJALI KOJI NISU DIO KOMPLETA:
•
Epruvete i materijal potrebni za uzorkovanje.
•
Automatske pipete s jednokratnim vrhom za 10, 20, 100 i 1000 µL.
•
Plastične epruvete za hemolizu.
•
Kalibracijske kuglice: Flow-Set fluorosfere (Ref. 6607007).
•
Specifična fluorescentna antitijela.
•
Izotipne kontrole.
•
Pufer (PBS: 0.01 M natrij-fosfat; 0.145 M natrij-klorid; pH 7.2).
•
Reagens za fiksaciju: na primjer IOTest 3 fiksacijska otopina (Ref. A07800).
•
Centrifuga.
•
Automatska mješalica (tip Vortex).
•
Protočni citometar.
PRECIZNOST S REAGENSOM VERSALYSE
NAPOMENA: Donji postupak važeći je za standardne aplikacije. Volumeni uzorka i/ili VersaLyse volumeni za
određene Beckman Coulter aplikacije mogu biti različiti. U tom slučaju, slijedite upute u tehničkoj brošuri o primjeni.
A– Postupak bez istovremene fiksacije
Priprema reagensa
Nije potrebna priprema. Koristite VersaLyse direktno iz bočice.
Za svaki analizirani uzorak, potrebna je još jedna epruveta s kontrolom uz epruvetu s uzorkom koji se testira, u
kojoj je izotipna kontrola prikladna za odabrano specifično bojenje dodana stanicama.
1. U svaku epruvetu s uzorkom za testiranje dodajte količinu antitijela koju preporučuje proizvođač za bojenje 5
x 10
5
leukocita.
2. U svaku epruvetu s kontrolom dodajte količinu izotipne kontrole koju preporučuje proizvođač za bojenje 5 x
10
5
leukocita.
3. Dodajte 100 µL uzorka (prethodno razrijeđenog ili drugačijeg) u obje epruvete. Pažljivo provrtite epruvete u
mješalici.
4. Inkubirajte prateći uvjete postavljene u tehničkim uputama za antitijela koja se koriste.
5. Dodajte 1 mL VersaLyse i odmah provrtite u mješalici 1 sekundu.
6. Inkubirajte najmanje 10 minuta na sobnoj temperaturi (18 – 25 °C), zaštićeno od svjetlosti.
U slučaju postupka bez ispiranja, epruvete su spremne za citometrijsku analizu.
NB: ako pripravke treba isprati, nemojte ih analizirati prije obavljanja 7. do 11. koraka.
7. Centrifugirajte 5 minuta pri 150 x g na sobnoj temperaturi.
VAŽNO: Zabilježeno je da pri nekorištenju istovremenog postupka fiksacije s koracima ispiranja, mogu nastati
stanice koje se dupliraju, poznate kao „stanice koje bježe“, vjerojatno zbog pogrešnih rezultata zbog promjene
u njihovim svojstvima rasapa svjetlosti i zbog činjenice da one izlaze izvan područja ograđivanja stanične
populacije
(6)
Snažna vrtnja u mješalici može oštetiti ove duplikate.
8. Aspiracijom uklonite supernatant.
9. Resuspendirajte stanični sediment s 3 mL PBS.
10. Centrifugirajte 5 minuta pri 150 x g na sobnoj temperaturi.
11. Aspiracijom uklonite supernatant i resuspendirajte stanični sediment u:
•
0,5 mL ili 1 mL PBS-a plus 0,1 % formaldehida ako se pripravci moraju držati manje od 24 sata. (0,1-postotni
formaldehidni PBS može se postići razrjeđivanjem 12,5 µL fiksativne otopine IOTest 3 (REF A07800)
koncentracije 10 x u 1 mL PBS-a).