B59380–AD
108 of 135
ПРОМИТИ ПРОБИ
Ако има промити проби преди оцветяване, последвано от лизиране на еритроцитите, много важно е да се
премахне всичкия супернатант след последното центрофугиране. Излишък от промиващия буфер върху
клетъчната утайка може да намали ефективността на VersaLyse.
ПОДГОТОВКА НА ПРОБИ
Концентрацията на левкоцитите в пробите трябва да бъде по-малка от 10
4
cells / µL (10
10
/L). Ако е
необходимо разредете с PBS до достигане на концентрация на левкоцити до 5 x 10
3
/ µL (5 x 10
9
/L).
Концентрацията на еритроцитите трябва да бъде по-малка от 6 x 10
6
/µL (6 x 10
12
/L). Препоръчва се да се
разреждат пробите с РBS за да се достигне концентрация на еритроцити до to 5 x 10
6
/µL.
Трябва да се използва най-високо разреждане за нагласяване на нужната концентрация на левкоцитите и
еритроцитите. Процедурите използват 100 µL на не предварително разредена или не разредена проби за
тест епруветка.
ДАННИ ЗА ВЛОШАВАНЕ
Всяка промяна във физическия облик на реактивите може да показва влошаване и реактивът не трябва да
се използва.
В случай на нарушаване на опаковката или ако получените данните показват някакви промени, моля
свържете се с местния дистрибутор или използвайте следния имейл адрес:
НЕОБХОДИМИ МАТЕРИАЛИ, КОИТО НЕ СА ДОСТАВЕНИ С КОМПЛЕКТА:
•
Епруветки и консумативи, необходими за вземане на пробата.
•
Автоматични пипети с връхчета заеднократна употреба от 10, 20, 100 и 1000 µL.
•
Пластмасови епруветки за хемолиза.
•
Калибрационни микросфери: Flow-Set Fluorospheres (Ref. 6607007).
•
Специфични флуоресцентниантитела (mAb)
•
Изотипни контроли.
•
Буфер (фосфатен буферен разтвор: 0,01 M натриев фосфат; 0,145 M натриев хлорид; pH 7,2).
•
Фиксиращ реактив: например IOTest 3 Fixative Solution (Кат. A07800).
•
Центрофуга.
•
Автоматична бъркалка (Vortex тип).
•
Флоуцитометър.
ПРОЦЕДУРА С РЕАГЕНТА VERSALYSE
ЗАБЕЛЕЖКА: Процедурите описани подолу са за стандартни приложения. Пробният и/или VersaLyse обеми
за някои Beckman Coulter приложения могат да се различават. Ако случаят е такъв, следвайте инструкциите
от представената техническа брошура.
A– Процедура без едновременно фиксиране
Подготовка на реактива.
Не е необходима подготовка. Използвайте VersaLyse директно от шишето..
За всяка анализирана проба в допълнение към тест епруветката се изисква контролна епруветка в която
изотипна контрола съответстваща на конкретно избрано оцветяване се добавя към клетките.
1. Във всяка тест епруветка се добавя препоръчано от производителя съдържание на антитела за да
оцвети 5 x 10
5
левкоцити.
2. Във всяка контролна епруветка се добавя препоръчано от производителя съдържание на изотипна
контрола за оцветяване на 5 x 10
5
левкоцити
3. Добавете 100 µL от пробата(предварително разредена или по друг начин) към двете епруветки.
Смесете съдържанието в епруветките леко
4. Инкубирайте, като следвате посочените в техническата брошура условия за използване на антитела.
5. Добавете 1 mL от VersaLyse и вортексирайте незабавно за 1 секунда.
6. Инкубирайте поне за 10 минути при стайна температура (18 -25°C), предпазени от светлина.