manualshive.com logo in svg

Beckman Coulter A09777, Manual, Page: 41 / 135

Share
Download
Beckman Coulter A09777 Manual Download Page 41

B59380–AD

41 of 135

PRÆSTATION

renhed og lymfocytudbytte

Renheden og lymfocytudbyttet er blevet evalueret ifølge anbefalingerne fra CDC (1). Blodet fra 10 raske donorer
udtaget i K3EDTA blev mærket med en blanding af antistoffer af de monoklonale antistoffer CD45-FITC og
CD14-PE. Middelværdierne af udbyttet og renheden såvel som området for de forskellige procedurer er angivet i
følgende tabeller:

Uden vask
Uden samtidig fiksering

Med samtidig fiksering

Udbytte

Renhed

Udbytte

Renhed

96,4

92,3

96,6

91,6

95 / 97,5

90,1 / 94,3

95,4 / 98,1

90,1 / 92,6

Med vask
Uden samtidig fiksering

Med samtidig fiksering

Udbytte

Renhed

Udbytte

Renhed

95,6

94,0

96,2

97,2

95 / 97,3

90,3 / 97,3

95,4 / 97,5

92,7 / 99,4

REPRODUCERBARHED INDEN FOR LABORATORIET

På den samme dag og med det samme cytometer blev der udført 31 målinger af procentandelen af
CD3+-lymfocytter på den samme blodprøve (fuldblod fra en rask donor). Den anvendte lyseringsprocedure var
samtidig fiksering uden vask. De opnåede resultater er sammenfattet i følgende tabel:

Fuldblod

Antal

Middel (%)

SD

CV (%)

CD3+

lymfocytter

31

60,72

1,61

2,7

BEGRÆNSNINGER

1. Flowcytometri kan frembringe falske resultater, hvis cytometret ikke er perfekt justeret, hvis der ikke

kompenseres korrekt for fluorescenslækage, og hvis regionerne ikke er omhyggeligt placeret.

2. Der vil opnås præcise og reproducerbare resultater, så længe de anvendte procedurer er i overensstemmelse

med den tekniske indlægsseddel og overholder god laboratoriepraksis.

3. I tilfælde af hyperleukocytose skal blodet fortyndes i PBS for at opnå en værdi på ca 5 x 10

9

leukocytter/L (7).

4. I tilfælde af en polyglobulinæmi skal prøven fortyndes i PBS, så der opnås 5 x 10

12

erytrocytter / L (8, 9, 10).

5. VersaLyse skal bringes til stuetemperatur (18 – 25 °C) inden brug.

6. Kontrollér præparatiorne med det blotte øje for at vurdere lyseringseffektiviteten. Hvis prøverne er tågede,

eller hvis lysdiffraktionshistogrammerne er underlige, kan lyseringen være ufuldstændig.

7. Erythoblasterne kan være ufuldstændigt lyserede og fremkomme i et lysdiffraktionshistogram på det samme

sted som leukocytterne (11).

8. Acetazolamid, en hæmmer af karbonanhydrase, kan hæmme virkningen af VersaLyse fuldstændigt (12).

9. I visse sygdomsstadier som f. eks, alvorlig nyresvigt eller hæmoglobinopati kan lyse af røde blodlegemer

være langsom, ufuldstændig eller ligefrem umulig. Det anbefales i dette tilfælde af isolere mononukleære
celler ved hjælp af en tæthedsgradient (for eksempel Ficoll) før farvning (13).

VAREMÆRKER

Beckman Coulter, det stiliserede logo og de Beckman Coulter produkt- og servicemærker, der er omtalt heri, er
varemærker eller registrerede varemærker tilhørende Beckman Coulter, Inc. i USA og andre lande.

Symbolnøgle

En ordliste over symboler findes på beckman.com/techdocs (dokumentnummer B60062)

Summary of Contents for A09777

Page 1: ...5 Português Portugal PT PT 31 Dansk DA 37 Svenska SV 42 Norsk NO 47 Ελληνικά EL 52 Lietuviškai LT 58 Magyar HU 63 Polski PL 68 Čeština CZ 74 Slovenčina SK 80 Türkçe TR 85 Русский RU 90 eesti keel ET 96 Hrvatski HR 101 Български BG 106 Română RO 112 Србија SR 117 Latviešu LV 122 Українська UK 127 APPENDIX 133 REFERENCES 134 2019 Beckman Coulter Inc All rights reserved ...

Page 2: ...ytometry In the case of a delay of several hours before analysis they may be fixed with PBS containing 0 1 formaldehyde see the technical leaflet of the IOTest 3 Fixative Solution Ref A07800 to prepare this PBS with 0 1 formaldehyde In this case prior washing is necessary The flow cytometer measures light diffusion and the fluorescence of cells It makes possible the delimitation of the population ...

Page 3: ... an EDTA salt as the anticoagulant NB Carefully read in the ANTICOAGULANT section the conditions under which other anticoagulants can be used The samples should be kept at room temperature 18 25 C and not shaken The sample should be homogenized by gentle agitation prior to taking the test sample The samples must be analyzed within 24 hours of venipuncture WASHED SAMPLES If you have to wash the sam...

Page 4: ...5 leucocytes 2 In each control tube add the amount of the isotypic control recommended by the manufacturer to stain 5 x 105 leucocytes 3 Add 100 µL of the sample prediluted or otherwise to both tubes Vortex the tubes gently 4 Incubate following the conditions set out in the technical leaflet for the antibodies used 5 Add 1 mL of VersaLyse and vortex immediately for 1 second 6 Incubate at least 10 ...

Page 5: ... 3 mL of PBS 10 Centrifuge for 5 minutes at 150 x g at room temperature 11 Remove the supernatant by aspiration and resuspend the cell pellet in 0 5 mL or 1 mL of PBS plus 0 1 of formaldehyde if the preparations are to be kept less than 24 hours A 0 1 formaldehyde PBS can be obtained by diluting 12 5 µL of the IOTest 3 Fixative Solution Ref A07800 at its 10X concentration in 1 mL of PBS These prep...

Page 6: ... in accordance with the technical insert leaflet and compatible with good laboratory practices 3 In the case of a hyperleucocytosis dilute the blood in PBS so as to obtain a value of approximately 5 x 109 leucocytes L 7 4 In the case of a polyglobulinaemia dilute the specimen in PBS so as to obtain 5 x 1012 red blood cells L 8 9 10 5 VersaLyse must be brought to room temperature 18 25 C before use...

Page 7: ...vec du PBS contenant 0 1 de formaldéhyde Voir la fiche technique de la Solution de Fixation IOTest 3 Réf A07800 pour préparer ce PBS à 0 1 de formaldéhyde Dans ce cas un lavage préalable est nécessaire Le cytomètre en flux mesure la diffusion de la lumière ainsi que la fluorescence des cellules Il permet de circonscrire la population d intérêt à l intérieur d une fenêtre électronique définie sur u...

Page 8: ... conserve entre 18 et 25 C Si un flacon de VersaLyse a été placé par inadvertance au réfrigérateur le remettre à température ambiante 18 25 C et attendre au moins une heure avant de l utiliser Flacon fermé le réactif est stable jusqu à la date de péremption indiquée sur le flacon Après ouverture le réactif reste stable pendant 90 jours ÉCHANTILLONS Les prélèvements de sang veineux ou de moelle oss...

Page 9: ...tomètre en flux PROCÉDURE avec RÉACTIF VERSALYSE Nota Bene Les procédures ci après sont valables pour des applications standard Les volumes d échantillon et ou de VersaLyse pour certaines applications Beckman Coulter peuvent être différents Si tel est le cas il faut suivre les instructions de la fiche technique de l application A Procédure sans fixation concomitante Préparation du réactif Aucune p...

Page 10: ... test un tube contrôle dans lequel les cellules seront mises en présence du contrôle isotypique correspondant au marquage spécifique choisi 1 Dans chaque tube test introduire la quantité d anticorps recommandée par le fabricant pour marquer 5 x 105 leucocytes 2 Dans chaque tube contrôle introduire la quantité de contrôle isotypique recommandée par le fabricant pour marquer 5 x 105 leucocytes 3 Ajo...

Page 11: ...eté 96 4 92 3 96 6 91 6 95 97 5 90 1 94 3 95 4 98 1 90 1 92 6 Avec lavage Sans fixation concomitante Avec fixation concomitante Reprise Pureté Reprise Pureté 95 6 94 0 96 2 97 2 95 97 3 90 3 97 3 95 4 97 5 92 7 99 4 REPRODUCTIBILITE INTRA LABORATOIRE Le même jour et sur le même cytomètre 31 déterminations du pourcentage de lymphocytes CD3 ont été menées sur le même prélèvement sang total d un donn...

Page 12: ... les cellules mononucléées en utilisant un gradient de densité Ficoll par exemple avant le marquage 13 MARQUES Beckman Coulter le logo stylisé et les marques des produits et des services Beckman Coulter mentionnées ici sont des marques ou des marques déposées de Beckman Coulter Inc aux États Unis et dans d autres pays Légende des symboles Glossaire des symboles disponibles sur la page beckman com ...

Page 13: ...Durchflusszytometer untersucht Die Präparate müssen bei 2 bis 8 C aufbewahrt und innerhalb kurzer Zeit im Durchflusszytometer analysiert werden Wenn die Analyse ein paar Stunden hinausgeschoben wird können sie mit 0 1 Formaldehyd enthaltendem PBS fixiert werden Richten Sie sich nach der Anleitung des IOTest 3 Fixationslösung Art A07800 für ein Verfahren um einen 0 1 Formaldehyd PBS zuzubereiteten ...

Page 14: ...chdocs beckmancoulter com verfügbar LAGERUNG UND STABILITÄT VersaLyse ist bei 18 bis 25 C aufzubewahren Wenn ein Fläschchen VersaLyse versehentlich in den Kühlschrank gestellt wurde dieses vor Anwendung mindestens eine Stunde bei Raumtemperatur 18 25 C erwärmen lassen Ungeöffnete Reagenzien sind bis zum auf dem Fläschchen aufgedruckten Haltbarkeitsdatum stabil Nach Öffnen des Fläschchens bleibt da...

Page 15: ...ixationsreagenz z B IOTest 3 Fixationslösung Art A07800 Zentrifuge Automatischer Rüttler Typ Vortex Durchflusszytometer VERFAHREN mit VERSALYSE REAGENZ HINWEIS Die nachfolgenden Verfahren gelten für Standardanwendungen Die Probe und oder VersaLyse Mengen können bei einigen Beckman Coulter Anwendungen abweichen In diesem Fall sind die Anleitungen des technischen Datenblatts der Anwendung zu befolge...

Page 16: ...eine ausreichende Menge Fix and Lyse Mischung vorbereiten 1 mL dieser Mischung je Röhrchen Für jede getestete Probe zusätzlich zum Teströhrchen ein Kontrollröhrchen vorsehen in dem die Zellen mit der Isotypiekontrolle der spezifisch angewendeten Markierung in Kontakt gebracht werden 1 In jedes Teströhrchen die vom Hersteller zum Markieren von 5 x 105 Leukozyten empfohlene Menge Antikörper geben 2 ...

Page 17: ...chung aus monoklonalen Antikörpern zweifach markiert Die durchschnittliche Überlappung und Reinheit sowie die Extremwerte der einzelnen Verfahren sind in den folgenden Tabellen zusammengefasst Ohne Waschschritt Ohne gleichzeitige Fixation Mit gleichzeitiger Fixation Wiederfindung Reinheit Wiederfindung Reinheit 96 4 92 3 96 6 91 6 95 97 5 90 1 94 3 95 4 98 1 90 1 92 6 Mit Waschschritt Ohne gleichz...

Page 18: ...VersaLyse völlig aufheben 12 9 Bei bestimmten Krankheitsbildern wie beispielsweise schwerem Nierenversagen oder Hämoglobinopathien kann die Lyse der Erythrozyten langsam unvollständig oder gar nicht ablaufen In diesem Fall wird empfohlen die mononukleären Zellen mithilfe eines Dichtegradienten z B Ficoll vor dem Färben zu isolieren 13 HANDELSMARKEN Beckman Coulter das stilisierte Logo und die in d...

Page 19: ...i alcune ore possono essere fissati con una piccola quantità di PBS contenente lo 0 1 di formaldeide Per preparare un PBS contenente lo 0 1 di formaldeide vedere la Scheda Tecnica de la Soluzione Fissante IOTest 3 Rif A07800 In tal caso è necessario un lavaggio prima dell analisi Il citometro a flusso misura la diffusione della luce nonché la fluorescenza delle cellule Questo strumento consente di...

Page 20: ... attendere almeno un ora prima di utilizzarlo Il reagente è stabile fino alla data di scadenza riportata sull etichetta del flacone a condizione che quest ultimo sia conservato chiuso Dopo l apertura il reagente mantiene la sua stabilità per 90 giorni CAMPIONI Il sangue venoso o il midollo osseo da analizzare devono essere messi in provette sterili contenenti EDTA come anticoagulante N B Nel parag...

Page 21: ...ssono essere diversi In questo caso seguire le istruzioni della scheda tecnica di applicazione A Procedura senza fissaggio concomitante Preparazione del reagente Non è necessaria alcuna preparazione Utilizzare VersaLyse direttamente dal flacone Per ogni campione analizzato è necessario prevedere oltre alla provetta test 1 provetta di controllo nella quale saranno messe le cellule in presenza del c...

Page 22: ...re 5 x 105 leucociti 2 In ogni provetta di controllo aggiungere la quantità di controllo isotipico raccomandata dal produttore al fine di marcare 5 x 105 leucociti 3 Aggiungere 100 µL del campione da testare prediluito o normale nelle 2 provette Agitare delicatamente al vortex 4 Incubare secondo le istruzioni indicate nella scheda tecnica degli anticorpi utilizzati 5 Aggiungere 1 mL di miscela Fix...

Page 23: ...o stesso giorno e con lo stesso citometro sono state effettuate 31 determinazioni della percentuale di linfociti CD3 sullo stesso prelievo sangue intero di un donatore sano La procedura di lisi utilizzata è quella con fissaggio concomitante e senza lavaggio Nelle seguenti tabelle sono riportati i risultati ottenuti Sangue intero Numero Media SD CV Linfociti CD3 31 60 72 1 61 2 7 LIMITAZIONI 1 risu...

Page 24: ...i dei prodotti e servizi di Beckman Coulter menzionati qui sono marchi commerciali o marchi commerciali registrati di Beckman Coulter Inc negli Stati Uniti e in altri paesi Elenco descrizioni simboli Il Glossario dei simboli è disponibile all indirizzo beckman com techdocs documento numero B60062 ...

Page 25: ... flujo En caso de aplazamiento del análisis algunas horas pueden fijarse con un PBS que contiene un 0 1 de formaldehído Véase la Ficha Técnica de la Solución de Fijación IOTest 3 Ref A07800 para preparar un PBS con 0 1 de formaldehído En este caso se necesita un lavado previo El citómetro de flujo mide la dispersión de la luz y la fluorescencia de las células Permite acotar la población de interés...

Page 26: ...es estable hasta la fecha de caducidad indicada sobre el frasco Una vez abierto el reactivo es estable durante 90 días MUESTRAS Las muestras de sangre venosa o de médula ósea deben recogerse en tubos estériles que contengan una sal de EDTA como anticoagulante ADVERTENCIA Leer atentamente en el párrafo ANTICOAGULANTE las condiciones en las que pueden utilizarse otros anticoagulantes Las muestras se...

Page 27: ...to sin fijación concomitante Preparación del reactivo No es necesaria ninguna preparación Utilizar VersaLyse directamente del frasco Para cada muestra analizada además del tubo problema se debe incluir un tubo control en el que se incubarán las células con el control isotípico correspondiente al marcaje específico seleccionado 1 En cada tubo problema introducir la cantidad de anticuerpo recomendad...

Page 28: ...bo control introducir la cantidad de control isotípico recomendada por el fabricante para marcar 5 x 105 leucocitos 3 Añadir 100 µL de la muestra prediluida o no en los 2 tubos Mezclar suavemente en el Vórtex 4 Incubar según las condiciones estipuladas en la ficha técnica de los anticuerpos utilizados 5 Añadir 1 mL de mezcla Fix and Lyse y mezclar inmediatamente en el Vórtex 1 segundo 6 Incubar al...

Page 29: ...tómetro se realizaron 31 determinaciones del porcentaje de linfocitos CD3 en la misma toma sangre entera de un donante sano El procedimiento de lisis utilizado fue el de fijación concomitante y ausencia de lavado Los resultados obtenidos se agrupan en la tabla siguiente Sangre entera Número Media DE CV Linfocitos CD3 31 60 72 1 61 2 7 LIMITACIONES 1 Los resultados de citometría de flujo pueden ser...

Page 30: ...arcas de productos y servicios de Beckman Coulter aquí mencionadas son marcas comerciales o marcas comerciales registradas de Beckman Coulter Inc en Estados Unidos y otros países Lista de símbolos El glosario de símbolos está disponible en beckman com techdocs número de documento B60062 ...

Page 31: ...e utilizando a citometria de fluxo No caso de ocorrer algum retardo de varias horas antes da analise as preparações podem ser fixadas com PBS contendo 0 1 de formaldeido consultar as técnicas do folheto relativas à Solução de Fixação IOTest 3 Ref A07800 para preparar o PBS com 0 1 de formaldeido Neste caso requer se de uma lavagem previa O citómetro mede a difusão de luz e a fluorescência das célu...

Page 32: ...erar pelo menos uma hora antes de utilizá lo Sempre que o frasco se mantiver ainda fechado a estabilidade do reagente será até a data de expiração indicada no frasco Estabilidade do frasco aberto o reagente é estável por 90 dias AMOSTRAS As amostras de sangue ou de medula óssea devem ser colhidas utilizando tubos estéreis contendo um sal de EDTA como anticoagulante NB Ler cuidadosamente na secção ...

Page 33: ...as amostras e ou do VersaLyse para certas aplicações Beckman Coulter podem ser diferentes Se for este o caso seguir as instruções sobre as técnicas de aplicação do folheto A Procedimento sem fixação concomitante Preparação do reagente Não é requerida preparação alguma Use o VersaLyse directamente do frasco Por cada amostra a analisar requer se além do tudo teste um tubo controlo no qual as células...

Page 34: ...te a quantidade de anticorpo recomendada pelo fabricante para corar 5 x 105 leucócitos 2 Adicione a cada tubo controlo a quantidade de controlo isotípico recomendado pelo fabricante para corar 5 x 105 leucócitos 3 Adicione 100 µL da amostra teste pré diluida ou noutra forma a ambos tubos Agite os tubos cuidadosamente em vórtex 4 Incube seguindo as condições referidas no folheto técnico dos anticor...

Page 35: ...e utilizando o mesmo citómetro foram processadas 31 medições da percentagem de linfócitos CD3 sobre a mesma amostra sangue total de um dador saudável O procedimento de lise utilizado foi com fixação concomitante sem lavagem Os resultados obtidos apresentam se na seguinte tabela Sangue Total Número Média DP CV CD3 Linfócitos 31 60 72 1 61 2 7 LIMITAÇÕES 1 A citometria de fluxo pode produzir falsos ...

Page 36: ...cas de produtos e serviços supramencionados da Beckman Coulter são marcas comerciais ou marcas comerciais registadas da Beckman Coulter Inc nos Estados Unidos e outros países Legenda dos símbolos O Glossário de símbolos está disponível em beckman com techdocs número do documento B60062 ...

Page 37: ...C og analyseres hurtigt ved anvendelse af flowcytometri Hvis analysen forsinkes i adskillige timer skal præparaterne fikseres med PBS indeholdende 0 1 formaldehyd se den tekniske indlægsseddel i IOTest 3 Fixative Solution Ref A07800 for at fremstille PBS med 0 1 formaldehyd I sådanne tilfælde er forudgående vask nødvendig Flowcytometret måler lysdiffusion og cellernes fluorescens Dette gør det mul...

Page 38: ...dtages i sterile rør der indeholder et EDTA salt som antikoagulans NB Læs omhyggeligt om hvornår der kan bruges andre antikoagulanser i afsnittet ANTIKOAGULANSER Prøverne skal opbevares ved stuetemperatur 18 25 C og må ikke omrystes Prøverne skal homogeniseres ved forsigtig omrystning inden udtagelse af testprøven Prøverne skal analyseres inden for 24 timer efter venepunkturen VASKEDE PRØVER Hvis ...

Page 39: ...5 x 105 leukocytter 2 Tilsæt til hvert kontrolrør den mængde isotypekontrol som anbefales af producenten til farvning af 5 x 105 leukocytter 3 Tilsæt 100 µL af prøven fortyndet eller ufortyndet til begge rør Vortex rørene forsigtigt 4 Inkuber ifølge betingelserne angivet på den tekniske indlægsseddel for de anvendte antistoffer 5 Tilsæt 1 mL VersaLyse og vortex straks i 1 sekund 6 Inkuber i mindst...

Page 40: ...t 7 Centrifuger i 5 minutter ved 150 x g ved stuetemperatur 8 Fjern supernatanten ved aspiration 9 Resuspender cellepelleten i 3 mL PBS 10 Centrifuger i 5 minutter ved 150 x g ved stuetemperatur 11 Fjern supernatanten med aspiration og resuspender cellepelleten i 0 5 mL eller 1 mL PBS plus 0 1 formaldehyd hvis præparaterne skal opbevares i under 24 timer En PBS med 0 1 formaldehyd kan opnås ved at...

Page 41: ...aceret 2 Der vil opnås præcise og reproducerbare resultater så længe de anvendte procedurer er i overensstemmelse med den tekniske indlægsseddel og overholder god laboratoriepraksis 3 I tilfælde af hyperleukocytose skal blodet fortyndes i PBS for at opnå en værdi på ca 5 x 109 leukocytter L 7 4 I tilfælde af en polyglobulinæmi skal prøven fortyndes i PBS så der opnås 5 x 1012 erytrocytter L 8 9 10...

Page 42: ...nabbt med användning av flödescytometri I fall av flera timmars försening av analysen kan de fixeras med PBS innehållande 0 1 formaldehyd se tekniskt produktblad till IOTest 3 Fixative Solution Ref A07800 för att preparera denna PBS med 0 1 formaldehyd I detta fall är föregående tvätt nödvändig Flödescytometern mäter ljusdiffusion och fluorescens på celler Den möjliggör avgränsningen av den intres...

Page 43: ...illfällen när andra antikoagulantia kan användas Proverna ska förvaras i rumstemperatur 18 25 C och får inte skakas Provet ska homogeniseras genom varsam blandning innan pipettering Proverna måste analyseras inom 24 timmar efter provtagning TVÄTTADE PROVER Om ni måste tvätta proverna innan inmärkning följd av lystring är det nödvändigt att avlägsna hela supernatanten efter sista centrifugeringen E...

Page 44: ...05 leukocyter 3 Tillsätt 100 µL av provet förspätt eller inte till båda rören Vortexa rören försiktigt 4 Inkubera enligt beskrivning i antikropparnas tekniska produktblad 5 Tillsätt 1 mL VersaLyse och vortexa omedelbart i 1 sekund 6 Inkubera minst 10 minuter i rums temperatur 18 25 C skyddat för ljus Vid procedur utan tvätt är rören färdiga för cytometrisk analys OBS Om preparationerna behöver tvä...

Page 45: ...d 0 5 mL eller 1 mL av PBS plus 0 1 formaldehyd om preparaten är avsedda att förvaras mindre än 24 timmar En 0 1 formaldehyd PBS kan erhållas genom spädning av 12 5 µL av IOTest 3 fixeringslösning REF A07800 i dess 10X koncentration i 1 mL PBS Dessa preparationer kan förvaras 24 timmar mellan 2 och 8 C skyddat för ljus ANTIKOAGULANS Trikalium EDTA salt K3EDTA ger det bästa resultatet oberoende av ...

Page 46: ... blodet i PBS för att erhålla ett värde på ungefär 5 x 109 leukocyter L 7 4 Vid fall av polyglobulinemi späd provet med PBS för att erhålla 5 x 1012 erytrocyter L 8 9 10 5 VersaLyse måste rumstempereras 18 25 C före användning 6 Verifera preparationerna med hjälp av blotta ögat för att fastställa lyseringens verkningsgrad Om de är grumliga eller om ljusspridingshistogrammen är onormala kan lyserin...

Page 47: ...Ved en forsinkelse på flere timer før analyse kan de fikseres med PBS som inneholder 0 1 formaldehyd se det tekniske bladet for IOTest 3 Fikserløsning Ref A07800 for å fremstille denne PBSen med 0 1 formaldehyd I dette tilfellet er det nødvendig å vaske først Flow cytometeret måler lysdiffusjonen og fluorescensen til cellene Dette muliggjør begrensningen av den interessante populasjonen innen det ...

Page 48: ...å se forholdene som antikoaguleringsagenter skal oppbevares under Prøvene må oppbevares ved romtemperatur 18 25 C og må ikke ristes Prøven må homogeniseres ved forsiktig risting før prøven tas Prøvene må analyseres inne 24 timer etter venepunksjon VASKEDE PRØVER Hvis du må vaske prøvene før farging etterfulgt av lysis av de røde blodcellene er det viktig å fjerne all supernatant etter den siste se...

Page 49: ...kontrollrør for å farge 5 x 105 leukocytter 3 Legg til 100 µL av prøven forhåndsuttynnet eller annet i begge rørene Ryst rørene forsiktig 4 Inkuber ved å følge betingelsene som er fremsatt i det tekniske bladet for de brukte antistoffene 5 Legg til 1 mL med VersaLyse og ryst umiddelbart i 1 sekund 6 Inkuber i minst 10 minutter i romtemperatur 18 25 C beskyttet fra lys Ved prosedyre uten vasking er...

Page 50: ...g i romtemperatur 11 Supernatanten fjernes ved aspirasjon og cellepelleten suspenderes i 0 5 mL eller 1 mL PBS pluss 0 1 formaldehyd hvis preparatene skal oppbevares i mindre enn 24 timer En 0 1 formaldehyd PBS kan oppnås ved å fortynne 12 5 µL IOTest 3 fikseringsløsning REF A07800 ved 10X konsentrasjon av denne i 1 mL PBS Disse preparatene kan oppbevares i 24 timer mellom 2 og 8 C og beskyttet mo...

Page 51: ...en brukes i henhold til det tekniske innleggsbladet og er kompatible med god laboratoriepraksis 3 I tilfelle hyperleukocytose fortynnes blodet i PBS for å oppnå en verdi på ca 5 x 109 leukocytter L 7 4 Ved polyglobulinanemi må prøven uttynnes prøven i PBS for å innhente 5 x 1012 blodceller L 8 9 10 5 VersaLyse må bringes til romtemperatur 18 25 C før bruk 6 Kontroller preparatene med det blotte øy...

Page 52: ...επηρέαστα από αυτό το βήμα αναλύονται μέσω κυτταρομετρίας ροής Τα παρασκευάσματα πρέπει να διατηρούνται μεταξύ 2 και 8 C και να αναλυθούν σύντομα με τον κυτταρομετρητή ροής Σε περίπτωση αναβολής της ανάλυσης για μερικές ώρες μπορούν να στερεωθούν με PBS που περιέχει 0 1 φορμαλδεΰδης Για να κατασκευάξετε ένα PBS με 0 1 φορμαλδεΰδη αναφερθείτε στις Τεχνικές Οδηγίες του Στερεωτικού Διαλύματος IOTest ...

Page 53: ...ισκεφθείτε γιατρό P337 P313 Εάν δεν υποχωρεί ο οφθαλμικός ερεθισμός συμβουλευθείτε επισκεφθείτε γιατρό P362 P364 Βγάλτε τα μολυσμένα ρούχα και πλύντε τα πριν τα χρησιμοποιήσετε Υδροχλωρικό οξύ 0 5 1 0 Πυρρολιδίνη 1 2 Το Δελτίο δεδομένων ασφάλειας είναι διαθέσιμο στη διεύθυνση techdocs beckmancoulter com ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Το VersaLyse διατηρείται μεταξύ 18 και 25 C Εάν κάποιο φιαλίδιο VersaLys...

Page 54: ...ΑΙΤΟΥΝΤΑΙ ΑΛΛΑ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ ΜΕ ΤΟ ΚΙΤ Σωλήνες για τη λήψη δειγμάτων και υλικά που απαιτούνται για τις δειγματοληψίες Αυτόματες πιπέττες και ειδικά ράμφη μιας χρήσης για τη λήψη ποσοτήτων όγκου 10 20 100 και 1 000 µL Πλαστικοί σωλήνες αιμόλυσης Σφαιρίδια βαθμονόμησης Φθοροσφαιρίδια Flow Set Κωδ 6607007 Εξειδικευμένα φθορίζοντα αντισώματα Ισοτυπικοί έλεγχοι Ρυθμιστικό διάλυμα PBS 0 01 M φωσφορικό ...

Page 55: ...α παρασκευάσματα σε θερμοκρασίες μεταξύ 2 και 8 C και μακριά από εστίες φωτός B Διαδικασία με συνακόλουθη στερεότητα Προετοιμασία του αντιδραστηρίου Παρασκευάστε αυτοσχεδίως το μείγμα Fix and Lyse προσθέτοντας 25 µL του Στερεωτικού Διαλύματος IOTest 3 10X ΜΗ ΑΡΑΙΩΜΕΝΟ Κωδ A07800 σε 1 mL του VersaLyse Ανακινήστε με vortex για 3 έως 5 δευτερόλεπτα ΣΗΜΕΙΩΣΗ στο πλαίσιο του μείγματος Fix and Lyse το Σ...

Page 56: ...νος ολικού αίματος που υπέστη λύση για παράδειγμα αρμόζει πρώτα η σταδιακή αύξηση της τιμής του διακριτή ώσπου να γίνουν ορατοί οι λευκοκυτταρικοί πληθυσμοί σε ένα ιστόγραμμα τύπου FS versus SS Στη συνέχεια η ακριβής ρύθμιση της ενίσχυσης των σημάτων FS και SS για να επιτευχθεί μια κατανομή των λευκοκυτταρικών πληθυσμών ίδια με αυτή των εικόνων 1 ή 2 ΑΠΟΔΟΣΗ ΛΕΜΦΟΚΥΤΤΑΡΙΚΗ ΟΜΑΛΟΤΗΤΑ ΚΑΙ ΚΑΘΑΡΟΤΗΤΑ...

Page 57: ...να έχουν υποστεί ημιτελή λύση και να εμφανιστούν σε ένα ιστόγραμμα διαθλάσεων του φωτός στο ίδιο μέρος με τα λευκοκύτταρα 11 8 Η ακεταζολαμίνη ένας αναστολέας της ανθρακικής αφυδρατάσης μπορεί να αναστείλει εντελώς τη δράση του VersaLyse 12 9 Σε ορισμένες ασθένειες όπως σοβαρή νεφρική ανεπάρκεια ή αιμοασφαιρινοπάθειες η λύση των ερυθρών κυττάρων ενδεχομένως να είναι αργή ατελής ή ακόμη να μην είνα...

Page 58: ...i išanalizuojami taikant srovinę citometriją Jeigu analizė kelioms valandoms atidedama preparatus galima fiksuoti PBS su 0 1 formaldehido IOTest 3 fiksavimo tirpalo techniniame lankstinuke rasite informacijos kaip paruošti šį PBS su 0 1 formaldehido REF A07800 Šiuo atveju reikia atlikti išankstinį plovimą Sroviniu citometru matuojama ląstelių šviesos difuzija ir fluorescencija Taip elektroniniame ...

Page 59: ...I Veninio kraujo arba kaulų čiulpų mėginius reikia imti į sterilius mėgintuvėlius su EDTA druska kaip antikoaguliantu DĖMESIO Skyriuje ANTIKOAGULIANTAS atidžiai perskaitykite sąlygas kuriomis galima naudoti antikoaguliantus Mėginius reikia laikyti kambario temperatūroje 18 25 C ir nepurtyti Prieš imdami bandymui mėginį jį homogenizuokite lengvai judindami Mėginiai turi būti išanalizuoti per 24 val...

Page 60: ...ymų mėgintuvėlį įpilkite gamintojo rekomenduojamą antikūnų kiekį kurio reikia 5 x 105 leukocitų nudažyti 2 Į kiekvieną kontrolinį mėgintuvėlį įpilkite gamintojo rekomenduojamą izotipinės kontrolinės medžiagos kiekį kurio reikia 5 x 105 leukocitų nudažyti 3 Į abu mėgintuvėlius įpilkite 100 µl mėginio atskiesto ar kitokio Lengvai pamaišykite mėgintuvėlių turinį sūkuriniu metodu 4 Inkubuokite laikyda...

Page 61: ...ošti citometrinei analizei DĖMESIO Jeigu preparatus reikia plauti neanalizuokite prieš tai neatlikę 7 11 veiksmų 7 Centrifuguokite 5 minutės kambario temperatūroje 150 x g jėga 8 Siurbdami pašalinkite supernatantą 9 Iš naujo pamerkite ląstelių granules į 3 ml PBS 10 Centrifuguokite 5 minutės kambario temperatūroje 150 x g jėga 11 Išsiurbdami pašalinkite supernatantą ir iš naujo suspenduokite ląste...

Page 62: ... bus atliekamos pagal pridedamą techninį lankstinuką ir atitiks gerąją laboratorijos praktiką gausite tikslius ir atkuriamus rezultatus 3 Hiperleukocitozės atveju kraują atskieskite PBS tirpalu taip kad gautumėte maždaug 5 x 109 leukocitų L vertę 7 4 Esant poliglobulinemijai atskieskite mėginį PBS kad gautumėte maždaug 5 x 1012 raudonųjų kraujo kūnelių L vertę 8 9 10 5 Prieš naudojant VersaLyse bū...

Page 63: ... analízis csak több órás késedelemmel végezhető el a minták fixálhatók 0 1 formaldehid tartalmú PBS sel lásd még az IOTest 3 Fixáló Oldat technikai leírását Ref A07800 a 0 1 formaldehid tartalmú PBS elkészítéséhez Ebben az esetben előzetes mosás szükséges Az áramlási citometria a sejtek fényszórását és fluoreszcenciáját vizsgálja Az áramlási citometria segítségével elhatárolható a vizsgálni kívánt...

Page 64: ... lezárt csőben a reagens a csövön jelölt lejárat napjáig tartható el A felnyitott reagens 90 napig tartható el MINTÁK A vénás vérmintákat és csontvelő mintákat steril antikoagulánsként EDTA sóját tartalmazó csövekbe kell gyűjteni Megjegyzés Figyelmesen olvassa el az Antikoaguláns részt hogy milyen feltételek mellett használhatók más antikoagulánsok A mintákat szobahőmérsékleten kell tárolni 18 25 ...

Page 65: ...tatót A Eljárás kísérő fixálás nélkül A reagensek előkészítése A reagenst nem kell előkészíteni A VersaLyse oldatot közvetlenül a csőből használja Minden analizálandó mintához a teszt csövön felül egy kontroll cső is szükséges amiben a sejtekhez választott specifikus festésnek megfelelő izotipikus kontroll van 1 Minden teszt csőhöz adjon annyi antitestet amennyit a gyártó 5 x 105 leukocita festésé...

Page 66: ... elegyet és azonnal vortexelje 1 másodpercig 6 Inkubálja szobahőmérsékleten 18 25 C fénytől védve 10 percig Mosás nélküli alkalmazás esetén a csövek készek a citometriás analízisre Megjegyzés Ha a készítményeket mosni kell ne analizálja a mintákat amíg a 7 11 es lépéseket el nem végezte 7 Centrifugálja a kémcsöveket 5 percig 150 x g sebességen szobahőmérsékleten 8 Szívja le a felülúszót 9 Oldja fe...

Page 67: ...y ha a régiók pozicionálását nem elég alaposan és körültekintően végezték 2 Ha az alkalmazott eljárások összhangban vannak a műszaki tájékoztatóban foglaltakkal és a laboratóriumi munkavégzés általános szabályaival a módszer pontos és reprodukálható eredményeket szogáltat 3 Hyperleucocytosis esetén PBS ben hígítsa fel a vért addig amíg el nem éri a körülbelül 5 x 109 leukocita L értéket 7 4 Poligl...

Page 68: ...niezwłocznie poddane analizie metodą cytometrii przepływowej W przypadku kilkugodzinnego opóźnienia przed analizą można je utrwalić buforem PBS zawierającym 0 1 formaldehydu sposób przygotowania PBS z 0 1 formaldehydu opisano w ulotce technicznej roztworu utrwalającego IOTest 3 Fixative Solution Odn A07800 W tym przypadku wcześniejsze płukanie nie jest konieczne Cytometr przepływowy mierzy rozpros...

Page 69: ...ie schowana do lodówki doprowadzić ją do temperatury pokojowej 18 25 C i przed użyciem odczekać przynajmniej godzinę W zamkniętej fiolce odczynnik zachowuje stabilność do daty ważności podanej na opakowaniu Po otwarciu odczynnik jest stabilny przez 90 dni PRÓBKI Próbki krwi żylnej lub szpiku kostnego muszą być pobierane do sterylnych probówek zawierających antykoagulant w postaci soli EDTA UWAGA U...

Page 70: ...ub odczynnika VersaLyse W takim przypadku postępować zgodnie z wytycznymi zamieszczonymi w instrukcji technicznej zastosowania A Procedura bez równoczesnego utrwalania Przygotowanie odczynnika Nie jest konieczne żadne przygotowywanie Użyj VersaLyse bezpośrednio z fiolki Dla każdej analizowanej próbki oprócz probówki testowej wymagana jest probówka kontrolna w której do komórek dodawana jest kontro...

Page 71: ...aganą do wybarwienia 5 x 105 leukocytów 2 Do każdej probówki kontrolnej dodaj objętość kontroli izotypowej zalecaną przez producenta wymaganą do wybarwienia 5 x 105 leukocytów 3 Dodaj po 100 µL próbki rozcieńczonej lub nie do obu probówek Łagodnie wymieszaj probówki wytrząsarką Vortex 4 Inkubuj zgodnie z wymaganiami opisanymi w instrukcji stosowanych przeciwciał 5 Dodaj 1 mL mieszaniny Fix and Lys...

Page 72: ...o samego cytometru przeprowadzono 31 pomiarów procentowej ilości limfocytów CD3 w jednej próbce pełna kerw zdrowego dawcy Do lizy zastosowano procedurę z równoczesnym utrwalaniem bez płukania Uzyskane wyniki podsumowuje tabela poniżej Krew całkowita Numer Średn SD CV Limfocyty CD3 31 60 72 1 61 2 7 OGRANICZENIA 1 Cytometria przepływowa może dawać fałszywe wyniki jeśli cytometr nie został idealnie ...

Page 73: ...ne tu znaki produktów i usług firmy Beckman Coulter są znakami towarowymi lub zastrzeżonymi znakami towarowymi firmy Beckman Coulter Inc w Stanach Zjednoczonych i innych krajach Legenda symboli Słowniczek symboli jest dostępny pod adresem beckman com techdocs numer dokumentu B60062 ...

Page 74: ...vým cytometrem V případě několikahodinového prodlení před analýzou je lze fixovat v PBS obsahujícím 0 1 formaldehyd návod jak připravit PBS s 0 1 formaldehydem viz příbalový leták fixačního roztoku IOTest 3 Ref A07800 V tomto případě je promytí vzorku před analýzou nezbytné Průtokový cytometr měří rozptyl světla a fluorescenci buněk Podle těchto parametrů jsou buňky lokalizovány uvnitř elektronick...

Page 75: ... hodinu Obsah neotevřené lahvičky je stabilní do data exspirace uvedeného na štítku Po otevření je reagencie stabilní po dobu 90 dní VZORKY Vzorky žilní krve nebo kostní dřeně musí být odebrány do sterilních zkumavek obsahujících jako antikoagulační činidlo sůl EDTA Pozn V oddíle ANTIKOAGULAční látky si pozorně přečtěte podmínky za jakých může být použito jiné antikoagulační činidlo než EDTA Vzork...

Page 76: ...e Příprava reagencie Není třeba provádět žádnou přípravu Použijte roztok VersaLyse přímo z lahvičky Pro každý analyzovaný vzorek je třeba kromě testové zkumavky připravit ještě jednu zkumavku kontrolní kde je k buňkám přidána negativní kontrola odpovídající vybranému specifickému značení 1 Do každé testové zkumavky přidejte protilátku v množství jaké je doporučeno výrobcem k označení 5 x 105 leuko...

Page 77: ...teré jsou uvedeny v příbalových informacích k použitým protilátkám 5 Přidejte 1 ml směsi Fix and Lyse a ihned 1 vteřinu míchejte na vortexu 6 Inkubujte alespoň 10 minut při laboratorní teplotě 18 25 C bez přístupu světla Jestliže provádíte postup bez promývání jsou nyní zkumavky připraveny k analýze průtokovým cytometrem Pozn Pokud je třeba vzorky promýt proveďte před analýzou nejprve postup popsa...

Page 78: ...y a v případě nesprávně umístěných oblastí regionů mohou při měření na průtokovém cytometru vznikat zavádějící výsledky 2 Přesné a reprodukovatelné výsledky lze získat pouze pokud použité metody odpovídají postupům uvedeným vpříbalovém letáku a jsou kompatibilní se zásadami správné laboratorní praxe 3 V případě hyperleukocytózy nařeďte krev pomocí PBS tak abyste získali hodnotu přibližně 5 x 109 l...

Page 79: ...B59380 AD 79 of 135 Klíč k symbolům Slovníček symbolů je k dispozici na adrese beckman com techdocs číslo dokumentu B60062 ...

Page 80: ... cytometri V prípade niekoľkohodinového odkladu pred analýzou je možné ich fixovať v PBS obsahujúcom 0 1 formaldehydu návod ako pripraviť PBS s 0 1 formaldehydom viď príbalový leták fixačného roztoku IOTest 3 Ref A07800 V tomto prípade je premytie vzorky pred analýzou nevyhnutné Prietokový cytometer meria rozptyl svetla a fluorescenciu buniek Podľa týchto parametrov sú bunky lokalizované vo vnútri...

Page 81: ...neotvorenej fľaštičky je stabilný do dátumu exspirácie ktorý je uvedený na štítku Po otvorení je reagencia stabilná po dobu 90 dní VZORKY Vzorky žilnej krvi alebo kostnej drene musia byť odobraté do sterilných skúmaviek ktoré obsahujú antikoagulačné činidlo EDTA Pozn V oddieli ANTIKOAGULAčné látky si pozorne prečítajte podmienky za ktorých môže byť použité iné antikoagulačné činidlo než EDTA Vzork...

Page 82: ... následnej fixácie Príprava reagencie Nie je potrebné vykonávať žiadnu prípravu Použite roztok VersaLyse priamo z fľaštičky Na každú analyzovanú vzorku je potrebné okrem testovacej skúmavky pripraviť ešte jednu skúmavku kontrolnú kde je k bunkám pridaná negatívna kontrola zodpovedajúca vybranému špecifickému značeniu 1 Do každej testovacej skúmavky pridajte protilátku v množstve aké odporúča výrob...

Page 83: ...k ktoré sú uvedené v príbalových informáciách k použitým protilátkam 5 Pridajte 1 ml zmesi Fix and Lyse a ihneď 1 sekundu miešajte na vortexe 6 Inkubujte aspoň 10 minút pri laboratórnej teplote 18 25 C bez prístupu svetla Ak použijete postup bez premývania skúmavky sú pripravené na analýzu na prietokovom cytometri Pozn Ak je potrebné vzorky premyť použite pred analýzou najprv postup popísaný v bod...

Page 84: ... oblastí regiónov môžu pri meraní na prietokovom cytometri vznikať zavádzajúce výsledky 2 Presné a reprodukovateľné výsledky možno získať len ak použité metódy zodpovedajú postupom uvedeným v príbalovom letáku a sú kompatibilné so zásadami správnej laboratórnej praxe 3 V teréne leukocytózy narieďte krv v PBS aby bola výsledná koncentrácia približne 5 109 leukocytov l 7 4 V prípade polyglobulinémie...

Page 85: ...anılarak hızla analiz edilmelidir Analizden önce birkaç saatlik bir gecikme olması durumunda 0 1 formaldehit içeren PBS ile sabitlenebilirler bu PBS yi 0 1 formaldehit ile hazırlamak için IOTest 3 Sabitleme Çözeltisinin Ref A07800 teknik prospektüsüne bakın Bu durumda önceden yıkama gereklidir Akım sitometrisi ışık diffüzyonunu ve hücrelerdeki floresanı ölçer İlgilenilen popülasyonun ışığın dikey ...

Page 86: ...ER Venöz kan veya kemik iliği numuneleri antikoagülan olarak EDTA tuzu içeren steril tüpler kullanılarak alınmalıdır Dikkat ANTİKOAGÜLAN bölümündeki başka hangi antikoagülanların kullanılabileceğinin belirtildiği koşulları dikkatle okuyun Numuneler oda sıcaklığında 18 25 C saklanmalıdır ve çalkalanmamalıdır Numune test örneği alınmadan önce yavaşça sallanarak homojen hale getirilmelidir Numuneler ...

Page 87: ... test tüpüne ek olarak içinde seçilmiş spesifik boyamaya karşılık gelen izotipik kontrolün hücrelere eklendiği bir kontrol tüpü gereklidir 1 Her test tüpüne 5 x 105 lökosidi boyamak için üretici tarafından tavsiye edilen antikor miktarını ekleyin 2 Her kontrol tüpüne 5 x 105 lökosidi boyamak için üretici tarafından tavsiye edilen izotipik kontrol miktarını ekleyin 3 Her iki tüpe 100 µL numune önce...

Page 88: ...ometrik analiz için hazırdır Dikkat Preparatların yıkanması gerekiyorsa adım 7 11 arasını gerçekleştirmeden analiz etmeyin 7 Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 150 x g de santrifüjleyin 8 Aspirasyon ile süpernatantı alın 9 3 mL PBS içinde hücre pelletini tekrar süspansiyon hale getirin 10 Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 150 x g de santrifüjleyin 11 Preparatlar 24 saatten daha az tutulacaksa yüzer...

Page 89: ...ir şekilde yerleştirilmemişse akım sitometrisi yanlış sonuçlara neden olabilir 2 Kullanılan prosedürler teknik prospektüse uygun olarak ve iyi laboratuvar uygulamalarına göre olduğu sürece doğru ve tekrarlanabilir sonuçlar elde edilecektir 3 Hiperlökositoz durumunda kanı PBS ile yaklaşık 5 x 109 lökosit L 7 elde edecek şekilde seyreltin 4 Poliglobulinemi durumunda 5 x 1012 kırmızı kan hücresi L el...

Page 90: ...вляется путем инкубации образца с антителом или антителами После этого эритроциты лизируют а лейкоциты на которые процесс лизиса не оказывает воздействия анализируют методом проточной цитометрии Образцы необходимо хранить при температуре от 2 до 8 C и быстро анализировать с помощью проточной цитометрии Если анализ откладывается на несколько часов препараты можно зафиксировать ФСБ содержащим 0 1 фо...

Page 91: ... ПРИ ПОПАДАНИИ В ГЛАЗА осторожно промывать водой несколько минут Снять контактные линзы если они есть и это легко сделать Продолжить промывание P332 P313 При раздражении кожи обратиться к врачу P337 P313 Если раздражение глаз продолжается обратиться к врачу P362 P364 Снять загрязненную одежду и промыть ее перед повторным использованием Соляная кислота 0 5 1 0 Пирролидин 1 2 Паспорт безопасности до...

Page 92: ... полученных результатов аналитическим характеристикам обратитесь пожалуйста к нашим специалистам e mail immuno techsup beckmancoulter com НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ КОТОРЫЕ НЕ ВХОДЯТ В НАБОР Пробирки для образцов и материалы для забора образцов Автоматические пипетки и одноразовые наконечники вместимостью 10 20 100 и 1 000 мкл Пластиковые пробирки для гемолиза Калибровочные микросферы Флуоросферы Flow ...

Page 93: ...егида если препараты предполагается анализировать в течение ближайших 2 часов Примечание Во всех случаях препараты следует хранить при температуре от 2 до 8 C в защищенном от света месте Б Процедура с одновременной фиксацией Приготовление реактива Готовят ex tempore смесь Fix and Lyse Фиксация плюс лизис путем добавления 25 мкл НЕРАЗВЕДЕННОГО фиксирующего раствора IOTest 3 10X Fixative Solution Re...

Page 94: ...реактивов для лизиса Поэтому обычная установка зафиксированная по умолчанию порогового threshold дискриминатора для этого параметра может оказаться недостаточной если использовался реактив VersaLyse Целесообразно провести настройку цитометра в первый момент накопления данных типичного препарата В случае лизированной цельной крови целесообразно вначале постепенно увеличивать значение дискриминатора...

Page 95: ...изиса оценивается изучением препаратов невооруженным глазом Если препараты мутные или гистограммы светорассеяния имеют необычный вид лизис мог быть неполным 7 Эритробласты могут быть лизированы не полностью и занимать на гистограмме светорассеяния такое же положение как и лейкоциты 11 8 Ингибитор карбоангидразы ацетазоламид может полностью подавить активность VersaLyse 12 9 При определенных заболе...

Page 96: ...kiiresti läbivoolu tsütomeetriaga Kui enne analüüsimist tekib mitmetunnine viivitus saab neid kinnitada 0 1 formaldehüüdi sisaldava PBS iga 0 1 formaldehüüdi sisaldava PBS i ettevalmistamise kohta vaadake teavet IOTest 3 fiksaatorlahuse tehnilistest juhistest viitenr A07800 Sellisel juhul on vajalik eelnev pesemine Läbivoolu tsütomeetria mõõdab valguse hajumist ja rakkude fluorestsentsi See muudab...

Page 97: ...90 päeva PROOVID Veenivere või luuüdiproovid tuleb võtta steriilsete katsutitega mis sisaldavad antikoagulandina EDTA naatriumsoola NB Lugege tähelepanelikult antikoagulantide jaotisest millistel tingimustel võib kasutada teisi antikoagulante Proove tuleb hoida toatemperatuuril 18 25 C ja neid ei tohi raputada Proov tuleb ühtlustada seda enne näidisproovi võtmist õrnalt loksutades Proove tuleb ana...

Page 98: ...t värvida 5 105 leukotsüüti 2 Lisage igasse kontrollkatsutisse isotüüp kontrolli hulk mida soovitab tootja et värvida 5 105 leukotsüüti 3 Lisage mõlemasse katsutisse 100 µl proovi eellahjendatud või mitte Keerutage katsuteid ettevaatlikult 4 Inkubeerige järgides kasutatud antikehade tehnilistes juhistes toodud tingimusi 5 Lisage 1 ml VersaLyse i ja keerutage kohe 1 sekundi jooksul 6 Inkubeerige vä...

Page 99: ...uril 5 minutit 150 g juures 11 Eemaldage aspireerimiseks ülemine vedelikukiht ja suspendeerige vereliblede graanuleid uuesti 0 5 ml või 1 ml PBS is ja 0 1 formaldehüüdis kui valmissegusid tuleb hoida vähem kui 24 tundi 0 1 formaldehüüdi PBS i saamiseks tuleb lahjendada 12 5 µl IOTest 3 fiksaatorlahust REF A07800 ja selle 10 kontsentratsiooni 1 ml PBS is Neid valmissegusid võid hoida kuni 24 tundi ...

Page 100: ...erd puhvris et saavutada väärtus umbes 5 109 leukotsüüti l 7 4 Polüglobulineemia puhul lahjendage proovi PBS is et saavutada ligikaudne väärtus 5 1012 punaliblet liitri kohta 8 9 10 5 VersaLyse peab enne kasutamist olema toatemperatuuril 18 25 C 6 Valmissegusid silmaga uurides hinnake lüüsimise tõhusust Kui valmissegud on hägused või valguse difraktsiooni histogrammid on tavatud võib lüüsimine oll...

Page 101: ...u 2 i 8 C i brzo analizirati protočnom citometrijom U slučaju odgode od nekoliko sati prije analize oni se mogu fiksirati s PBS koja sadrži 0 1 formaldehida pogledajte tehničke upute IOTest 3 fiksacijske otopine Ref A07800 za pripremu ove PBS sa 0 1 formaldehida U ovom je slučaju potrebno prethodno ispiranje Protočni citometar mjeri difuziju svjetla i fluorescenciju stanica To omogućuje razlikovan...

Page 102: ...ilnim epruvetama koje sadrže EDTA sol kao antikoagulans NB U odjeljku ANTIKOAGULANS pažljivo pročitajte uvjete pod kojima se mogu koristiti drugi antikoagulansi Uzorci se moraju čuvati na sobnoj temperaturi 18 25 C i ne smiju se potresati Uzorak se treba homogenizirati pažljivim miješanjem prije uzimanja probnog uzorka Uzorci se moraju analizirati unutar 24 sata od punkcije vene ISPRANI UZORCI Ako...

Page 103: ...dajte količinu antitijela koju preporučuje proizvođač za bojenje 5 x 105 leukocita 2 U svaku epruvetu s kontrolom dodajte količinu izotipne kontrole koju preporučuje proizvođač za bojenje 5 x 105 leukocita 3 Dodajte 100 µL uzorka prethodno razrijeđenog ili drugačijeg u obje epruvete Pažljivo provrtite epruvete u mješalici 4 Inkubirajte prateći uvjete postavljene u tehničkim uputama za antitijela k...

Page 104: ...stupka bez ispiranja epruvete su spremne za citometrijsku analizu NB ako pripravke treba isprati nemojte ih analizirati prije obavljanja 7 do 11 koraka 7 Centrifugirajte 5 minuta pri 150 x g na sobnoj temperaturi 8 Aspiracijom uklonite supernatant 9 Resuspendirajte stanični sediment s 3 mL PBS 10 Centrifugirajte 5 minuta pri 150 x g na sobnoj temperaturi 11 Uklonite supernatant aspiracijom te pono...

Page 105: ...ezultati dobivat će se tako dugo dok su korišteni postupci u skladu s tehničkim uputama i kompatibilni s dobrom laboratorijskom praksom 3 U slučaju hiperlukocitoze razrijedite krv u PBS u kako biste dobili vrijednost od približno 5 x 109 leukocita L 7 4 U slučaju poliglobulinemije razrijedite uzorak u PBS tako da dobijete 5 x 1012 crvenih krvnih stanica L 8 9 10 5 VersaLyse se mora ostaviti na sob...

Page 106: ...между 2 и 8 C и анализират бързо използвайки флоуцитометрия В случай на отлагане с няколко часа преди анализа те могат да бъдат фиксирани с PBS съдържащ 0 1 формалдехид вижте техническата брошура на IOTest 3 Fixative Solution Кат A07800 за приготвяне на този PBS с 0 1 формалдехид В този случай е необходимо предварително промиване Флоуцитометърът измерва дифузията на светлината и флуоресценцията на...

Page 107: ...цински съвет помощ P362 P364 Свалете замърсеното облекло и го изперете преди повторна употреба Солна киселина 0 5 1 0 Пиролидин 1 2 Информационният лист за безопасност е наличен на адрес techdocs beckmancoulter com СЪХРАНЕНИЕ И СТАБИЛНОСТ VersaLyse се съхранява между 18 И 25 C Ако едно шише от VersaLyse се съхранява неправилно в хладилник оставете го на стайна температура 18 25 C и изчакайте поне ...

Page 108: ... 20 100 и 1000 µL Пластмасови епруветки за хемолиза Калибрационни микросфери Flow Set Fluorospheres Ref 6607007 Специфични флуоресцентниантитела mAb Изотипни контроли Буфер фосфатен буферен разтвор 0 01 M натриев фосфат 0 145 M натриев хлорид pH 7 2 Фиксиращ реактив например IOTest 3 Fixative Solution Кат A07800 Центрофуга Автоматична бъркалка Vortex тип Флоуцитометър ПРОЦЕДУРА С РЕАГЕНТА VERSALYS...

Page 109: ...3 Fixative solution Кат A07800 се използва при четиридесет пъти концентриран разтвор и не като 10X разтвор номинална концентрация Подгответе достатъчен обем от Fix andLyse в зависимост от броя на пробите за лизиране 1 mL от сместа за епруветка За всяка анализирана проба се изисква една контрола в която клетките са смесени с отрицателна контрола съответстваща на избраното специфично оцветяване 1 çК...

Page 110: ...донори се взема в K3EDTA епруветки етикирани със смес на моноклонални антитела CD45 FITC и CD14PE Средната стойност за възстановяване и чистота и границите на различните процедури са представени на следната таблица Без промиване Без едновременно фиксиране С едновременно фиксиране Recovery Purity Recovery Purity 96 4 92 3 96 6 91 6 95 97 5 90 1 94 3 95 4 98 1 90 1 92 6 С промиване Без едновременно ...

Page 111: ...кои болестни състояния като например тежка бъбречна недостатъчност или хемоглобинопатии лизирането на червените кръвни клетки може да бъде бавно непълно или дори невъзможно В този случай се препоръчва да изолирате мононуклерните клетки с помощта на градиент на плътността Ficoll например преди оцветяването 13 ТЪРГОВСКИ МАРКИ Beckman Coulter стилизираното лого и маркировките за продуктите и услугите...

Page 112: ... În cazul unei întârzieri de câteva ore înainte de efectuarea analizei preparatele pot fi fixate cu PBS conținând 0 1 formaldehidă consultați prospectul tehnic al soluție de fixare IOTest 3 REF A07800 pentru prepararea acestui PBS cu 0 1 formaldehidă În acest caz este necesară spălare prealabilă Citometrul în flux măsoară difuzia luminii și fluorescența celulelor Acesta face posibilă delimitarea p...

Page 113: ...expirării arătată pe flacon După deschidere reactivul este stabil timp de 90 de zile PROBE Probele de sânge venos sau măduvă osoasă trebuie prelevate în eprubete sterile conținând o sare EDTA ca anticoagulant NB citiți cu atenție în secțiunea ANTICOAGULANT condițiile în care pot fi utilizați alte anticoagulante Probele trebuie păstrate la temperatura camerei 18 25 C și nu trebuie agitate Acestea n...

Page 114: ...e control în care la celule se adaugă controlul izotipic corespunzător colorării specifice selectate 1 Adăugați în fiecare eprubetă cantitatea de anticorpi recomandată de către producător pentru colorarea a 5 x 105 leucocite 2 Adăugați în fiecare eprubetă de control cantitatea de ser de control izotipic recomandată de către producător pentru colorarea a 5 x 105 leucocite 3 Adăugați 100 µl de probă...

Page 115: ...de 10 minute la temperatura camerei 18 C 25 C într un loc ferit de lumină În cazul unei proceduri fără spălare eprubetele sunt pregătite pentru analiza citometrică NB dacă preparatele trebuie spălate nu analizați înainte de a efectua pașii 7 11 7 Centrifugați timp de 5 minute la 150 x g la temperatura camerei 8 Îndepărtați supernatantul prin aspirare 9 Resuspendați peleta de celule în 3 ml de PBS ...

Page 116: ...ost poziționate corect 2 Se vor obține rezultate corecte și reproductibile dacă procedurile utilizate respectă prospectul tehnic și bunele practici de laborator 3 În cazul unei hiperleucocitoze diluați sângele în PBS astfel încât să obțineți o valoare de aproximativ 5 x 109 leucocite L 7 4 În cazul unei poliglobulinemii diluați proba în PBS pentru a obține 5 x 1012 eritrocite L 8 9 10 5 Reactivul ...

Page 117: ...čnom citometrijom U slučaju odlaganja od nekoliko sati pre analize preparati se mogu fiksirati PBS om koji sadrži 0 1 formaldehid pogledajte tehničko uputstvo za IOTest 3 fiksativni rastvor REF A07800 da biste pripremili ovaj PBS sa 0 1 formaldehidom U ovom slučaju je neophodno prethodno pranje Protočni citometar meri difuziju svetlosti i fluorescenciju ćelija On omogućava razgraničenje populacije...

Page 118: ... je stabilan 90 dana UZORCI Uzorci iz venske krvi ili koštane srži moraju se uzimati sterilnim epruvetama za uzorak koje sadrže EDTA so kao antikoagulans Napomena Pažljivo pročitajte odeljak ANTIKOAGULANS koji sadrži uslove pod kojima se mogu koristiti drugi antikoagulansi Uzorke treba čuvati na sobnoj temperaturi 18 25 C i ne tresti Uzorak treba pre uzimanja testnog uzorka homogenizovati blagim m...

Page 119: ... jedna kontrolna epruveta za uzorak u kojoj se izotipska kontrola koja odgovara izabranom specifičnom bojenju dodaje u ćelije 1 U svaku testnu epruvetu za uzorak dodajte količinu antitela koju preporučuje proizvođač da biste obojili 5 x 105 leukocita 2 U svaku kontrolnu epruvetu za uzorak dodajte količinu izotipske kontrole koju preporučuje proizvođač da biste obojili 5 x 105 leukocita 3 Dodajte 1...

Page 120: ...noj mešalici 1 sekundu 6 Inkubirajte najmanje 10 minuta na sobnoj temperaturi 18 25 C zaštićeno od svetlosti U slučaju postupka bez pranja epruvete za uzorak su spremne za citometrijsku analizu Napomena Ako preparate treba isprati nemojte vršiti analizu pre izvršavanja koraka 7 do 11 7 Centrifugirajte 5 minuta na 150 x g na sobnoj temperaturi 8 Usisajte supernatant 9 Ponovo suspendujte talog ćelij...

Page 121: ...roduktivni rezultati c e se dobiti sve dok su postupci koji se koriste u skladu sa tehničkim uputstvom za umetanje i usklađeni sa dobrim laboratorijskim praksama 3 U slučaju hiperleukocitoze razredite krv u PBS u tako da se dobije vrednost od oko 5 x 109 leukocita L 7 4 U slučaju poliglobulinemije razredite uzorak u PBS u tako da dobijete 5 x 1012 eritrocita l 8 9 10 5 VersaLyse rastvor se pre upo...

Page 122: ...ūrā un strauji jāanalizē izmantojot plūsmas citometriju Ja pirms analizēšanas notiek dažu stundu kavēšanās sagataves var fiksēt ar PBS kurā ir 0 1 formaldehīda skatīt IOTest 3 fiksatīvā šķīduma REF A07800 tehnisko lietošanas instrukciju šī PBS sagatavošanai ar 0 1 formaldehīda Šajā gadījumā ir nepieciešama iepriekšēja skalošana Plūsmas citometrs mēra gaismas difūziju un šūnu fluorescenci Tādēļ ir ...

Page 123: ...u venozo asiņu vai kaulu smadzeņu paraugus ir jāizmanto sterili stobriņi kuros ir EDTA sāls kas darbojas kā antikoagulants NB Sadaļā ANTIKOAGULANTI uzmanīgi izlasiet kādos apstākļos var izmantot citus antikoagulantus Paraugi ir jāuzglabā istabas temperatūrā 18 25 C un tos nedrīkst sakratīt Pirms testa parauga ņemšanas ir jāveic parauga homogenizācija viegli saskalinot paraugu Paraugu analīze ir jā...

Page 124: ...kocītus 2 Katrā kontroles stobriņā pievienojiet ražotāja ieteikto izotipēšanas kontroles daudzumu lai iekrāsotu 5x105 leikocītus 3 Ievadiet abos stobriņos 100 µl parauga iepriekš šķīdināta vai nešķīdināta Saudzīgi saskaliniet stobriņus 4 Inkubējiet apstākļos kas ir norādīti izmantoto antivielu tehniskajā lietošanas instrukcijā 5 Pievienojiet 1 ml VersaLyse un nekavējoties saskaliniet 1 sekundi 6 I...

Page 125: ...abas temperatūrā izmantojot 150 x g 11 Aspirējot noņemiet virsējo slāni un atkārtoti šķaidiet šūnu koncentrātu izmantojot 0 5 ml vai 1 ml PBS ar 0 1 formaldehīda ja sagataves tiks uzglabātas mazāk nekā 24 stundas 0 1 formaldehīda PBS var iegūt 1 ml PBS šķīduma izšķīdinot 12 5 µl IOTest 3 fiksēšanas šķīdumā REF A07800 10 x koncentrācijā Šīs sagataves var uzglabāt 24 stundas 2 8 C temperatūrā sargāj...

Page 126: ...ksi 3 Hiperleikocitozes gadījumā atšķaidiet asinis ar PBS lai iegūtā vērtība būtu apmēram 5x109 leikocīti l 7 4 Poliglobulīnanēmijas gadījumā šķīdiniet paraugu PBS šķīdumā līdz iegūstat 5x1012 sarkano asinsķermenīšu l 8 9 10 5 Pirms izmantošanas VersaLyse šķīdumam ir jāsasilst līdz istabas temperatūrai 18 25 C 6 Ar neapbruņotu aci verificējiet sagataves novērtējot lizēšanas efektivitāti Ja sagatav...

Page 127: ...на які не впливає цей процес досліджують методом проточної цитометрії Препарати слід зберігати при температурі від 2 до 8 С та швидко аналізувати з використанням проточної цитометрії У випадку затримки протягом декількох годин до аналізу вони можуть бути зафіксовані за допомогою ФСБ що містить 0 1 формальдегід див технічну інструкцію з використання фіксуючого розчину IOTest 3 Ref A07800 для підгот...

Page 128: ...чей не зникне звернутися до лікаря P362 P364 Зняти забруднений одяг і випрати його перед повторним використанням Хлористоводнева кислота 0 5 1 0 Піролідин 1 2 Паспорт безпеки доступний на сайті techdocs beckmancoulter com ЗБЕРІГАННЯ ТА СТАБІЛЬНІСТЬ VersaLyse зберігається при температурі від 18 до 25 C Якщо флакон з VersaLyse ненавмисно зберігали в холодильнику доведіть його до кімнатної температур...

Page 129: ...ні для забору зразків Автоматичні піпетки з одноразовими наконечниками на 10 20 100 та 1000 мкл Пластикові пробірки для гемолізу Калібрувальні частки флуоросфери Flow Set REF 6607007 Специфічні флуоресцентні антитіла Ізотипічний контроль Буфер забуферений фосфатом фізіологічний розчин PBS 0 01 М фосфату натрію 0 145 М хлориду натрію рН 7 2 Реагент для фіксації тобто фіксуючий розчин IOTest 3 Ref A...

Page 130: ...ю фіксацією Підготовка реагенту Приготуйте суміш фіксуючого розчину та розчину для лізису для негайного застосування додавши 25 мкл НЕРОЗВЕДЕНОГО фіксуючого розчину IOTest 3 10X Ref А07800 до 1 мл VersaLyse Перемішайте вміст пробірок у вортексі протягом 3 5 секунд ПРИМІТКА У контексті суміші фіксуючого розчину та розчину для лізису фіксуючий розчин IOTest 3 Ref A07800 використовують як 40 кратно к...

Page 131: ...им для VersaLyse Тому рекомендується коригувати цитометр під час перших моментів збору даних типового препарату тобто у випадку лізованої цільної крові рекомендується спочатку поступово збільшувати значення дискримінатора до тих пір поки на гістограмі типу FS у порівнянні з гістограмою типу SS не буде видно популяції лейкоцитів потім ретельно відкоригувати посилення сигналів FS та SS для отримання...

Page 132: ... Якщо препарати мутні або гістограми дифракції світла мають незвичайний вигляд лізис може бути неповним 7 Еритробласти можуть не до кінця лізуватися та відображатися на гістограмі дифракції світла в тому самому місці що й лейкоцити 11 8 Ацетазоламід інгібітор карбоангідрази може повністю пригнітити дію розчину для лізису VersaLyse 12 9 При деяких захворюваннях таких як важка ниркова недостатність ...

Page 133: ...rmal whole blood sample lyzed with VersaLyse Ref A09777 using the no fixation concomitant to lysis and NO WASH procedure Figure 1 or WASH procedure Figure 2 Acquisition is performed with a Beckman Coulter Navios flow cytometer equipped with the Navios analysis software Figure 1 Figure 2 B59380 AD 133 of 135 ...

Page 134: ...henotyping in HIV patients Comparison to dual colour protocols 1995 Scand J Immunol 41 114 120 7 H42 A2 Vol 27 No 16 P30 Enumeration of Immunologically Defined Cell Populations by Flow Cytometry Approved Guideline Second Edition 8 The polycthemias In Hematology In Basic Principles and practice Hoffman R Benz EJ Shattil et al Eds Elsevier Philadelphia Pennsylvania 2005 1209 1245 9 Silver RT1 Chow W...

Page 135: ... Paulo Brasil CNPJ 42 160 812 0001 44 Telefone 0800 771 8818 ООО Бекмен Культер 109004 Москва Россия ул Станиславского д 21 стр 3 Тел 7 495 228 67 00 e mail beckman ru beckman com IMMUNOTECH S A S a Beckman Coulter Company 130 avenue de Lattre de Tassigny BP 177 13276 Marseille cedex 9 France 33 491 172 727 December 2019 B59380 AD 135 of 135 ...

Reviews:

No comments