B60231–AE
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Pipetas de calibración estándar (20 µL, 100 µL, 2 mL) y puntas.
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Mezclador automático (tipo Vórtex).
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Cronómetro.
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Citómetro de flujo.
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Software del sistema stemCXP SOLO para el análisis automatizado de Stem-Trol Control Cells en citómetros
de flujo FC 500 equipados con el software CXP.
PROCEDIMIENTO
Para obtener una información más completa sobre un análisis automático, consulte la stemCXP System Guide
(Guía del sistema stemCXP) proporcionada con el software del sistema stemCXP.
Para un análisis manual, consulte el estuche Stem-Kit Reagents incluido y el siguiente procedimiento.
NOTA:
Con el fin de estandarizar el análisis, al recibir nuevos estuches Stem-Kit Reagents y,
posteriormente a intervalos diarios, realice una comprobación de proceso mediante la
tinción de las Stem-Trol Control Cells con una muestra de sangre periférica normal
procedente de un donante sano. Además, como las Stem-Trol Control Cells son células
estabilizadas (es decir, células no viables), el marcador de viabilidad 7-AAD se puede
comprobar visualmente en las Stem-Trol Control Cells (consulte la sección Creación
de histograma).
Compruebe que el citómetro de flujo esté correctamente alineado y calibrado para medir las intensidades de
florescencia conforme a las instrucciones del fabricante y del laboratorio. Asegúrese de que las configuraciones
de compensación de fluorescencia estén ajustadas de forma adecuada conforme a las instrucciones del fabricante
y del laboratorio.
Los reactivos de control y los anticuerpos deben estar a temperatura ambiente.
Para cada experimento, etiquete un tubo de muestra: TROL 45/34/7-AAD.
1. Pipetee 20 µL de CD45-FITC / CD34-PE en el tubo de muestra.
2. Pipetee 20 µL de marcador de viabilidad 7-AAD en el tubo de muestra.
IMPORTANTE:
Existe un riesgo de lisis incompleta si la muestra sanguínea permanece en la parte
superior o lateral del tubo de muestra. Realice el pipeteado con cuidado para prevenir
que la sangre entre en contacto con la parte superior o lateral del tubo de muestra.
Si fuera necesario, limpie el tubo de muestra con ayuda de bastoncillo de algodón
paraeliminar todo rastro de muestra sanguínea de la parte superior o lateral tubo de
muestra.
3. En la parte inferior del tubo de muestra, pipetee con precisión 100 µL de una muestra de sangre entera normal
bien mezclada utilizando una pipeta calibrada de desplazamiento positivo o una pipeta de repetición.
4. Prepare y añada el Stem-Trol:
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Mezcle en vórtex las Stem-Trol Control Cells durante 5 segundos.
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Pipetee con precisión 20 µL de Stem-Trol Control Cells en el tubo de muestra.
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Mezcle al Vórtex los tubos de muestra durante 5 segundos.
5. Incube a temperatura ambiente (18–25 °C) durante 20 minutos, protegido de la luz.
6. Añada 2 mL de 1X NH
4
Cl Lysing Solution en un tubo de muestra y mezcle en vórtex inmediatamente durante
5 segundos.
Para los detalles sobre cómo preparar la Lysing Solution, consulte el estuche Stem-Kit Reagents incluido.
7. Incube a temperatura ambiente durante 10 minutos, protegido de la luz.
8. Conserve los tubos de muestra en un bastidor a una temperatura entre 2 y 8 °C y en un lugar protegido de
la luz.
