B60231–AE
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Kalibrierte Standardpipetten (20 µL, 100 µL, 2 mL) mit Spitzen.
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Vortex-Rüttler
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Zeitgeber
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Durchflusszytometer.
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stemCXP-Systemsoftware NUR für die automatisierte Analyse der Stem-Trol Control Cells an
FC 500-Durchflusszytometern mit der CXP-Software.
DURCHFÜHRUNG
Eine vollständige Anleitung zur automatischen Analyse ist im stemCXP System Guide (System-Handbuch) der
stemCXP-Systemsoftware enthalten.
Weitere Informationen zur manuellen Analyse finden Sie in der Packungsbeilage zu den Stem-Kit Reagents
(Reagenzien) und unter der folgenden Vorgehensweise.
ANMERKUNG:
Zur Standardisierung der Analyse beim Erhalt neuer Stem-Kit Reagents und
anschließend in regelmäßigen täglichen Abständen eine Prozessprüfung durchführen,
indem Sie die Stem-Trol Control Cells mit einer normalen umfänglichen Blutprobe von
einem gesunden Spender einfärben. Da Stem-Trol Control Cells stabilisierte Zellen (also
nicht lebensfähige Zellen) sind, kann außerdem die 7-AAD Viability Dye-Vitalitätsfärbung
bei Stem-Trol Control Cells visuell überprüft werden (siehe Überschrift: „Histogram
Creation“ (Histogrammerstellung)).
Das Durchflusszytometer muss richtig justiert und für die Fluoreszenzintensität entsprechend den Angaben des
Herstellers und den Laborrichtlinien standardisiert sein.
Die Einstellungen für die Fluoreszenzkompensation
müssen entsprechend den Angaben des Herstellers und den Laborrichtlinien richtig justiert sein.
Das Kontrollreagenz und die Antikörper auf Raumtemperatur bringen.
Für jedes Experiment ein Probenröhrchen beschriften: TROL 45/34/7-AAD.
1. 20 µL von CD45-FITC/CD34-PE in das Probenröhrchen pipettieren.
2. 20 µL 7-AAD Viability Dye-Vitalitätsfarbstoff in das Probenröhrchen pipettieren.
WICHTIG:
Es besteht das Risiko einer unvollständigen Lysierung, wenn Blutproben oben oder an
der Seite des Probenröhrchens verbleiben. Beim Pipettieren vorsichtig vorgehen, um zu
verhindern, dass Blut an die Oberseite oder an die Seite des Probenröhrchens gelangt.
Das Probenröhrchen bei Bedarf mit einem Baumwolltupfer reinigen, um alle Spuren der
Blutprobe von der Oberseite oder der Seite des Probenröhrchens zu entfernen.
3. In den Boden des Probenröhrchens exakt 100 µL einer gut vermischen normalen Vollblutprobe mit einer
kalibrierten positiven Versetzungs- oder einer Übertragungspipette pipettieren.
4. Stem-Trol vorbereiten und hinzufügen:
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Die Stem-Trol Control Cells 5 Sekunden lang vortexen.
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Exakt 20 µL der Stem-Trol Control Cells in das Probenröhrchen pipettieren.
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Die Probenröhrchen 5 Sekunden lang vortexen.
5. Bei Raumtemperatur (18–25 °C) 20 Minuten lang vor Lichteinstrahlung geschützt inkubieren.
6. 2 mL der vorbereiteten 1X NH
4
Cl Lysing Solution in das Probenröhrchen geben und sofort 5 Sekunden lang
drehen.
Detaillierte Informationen zur Vorbereitung der Lysing Solution finden Sie in der Packungsbeilage zu den
Stem-Kit Reagents.
7. Bei Raumtemperatur 10 Minuten lang vor Lichteinstrahlung geschützt inkubieren.
8. Die Probenröhrchen in einem Gestell auf Eis lagern (2–8 °C) und vor Lichteinstrahlung schützen.
WICHTIG:
Es besteht das Risiko fehlerhafter Ergebnisse, wenn Luftblasen pipettiert werden.
Eine übermäßige Vermischung von Stem-Count oder Flow-Count Fluorospheres
kann Luftblasen verursachen. Die Stem-Count oder Flow-Count Fluorospheres nicht
übermäßig vermischen und keine Luftblasen in die Probenröhrchen pipettieren.
