B60231–AE
76 of 128
•
Kalibrowana pipeta z dodatnim wypieraniem (20 µL, 100 µL, 2 mL) i końcówki lub kalibrowana pipeta
powtarzalna (20 µL, 100 µL, 2 mL) oraz końcówki.
•
Kalibrowane pipety standardowe (20 µL, 100 µL, 2 mL) i końcówki.
•
Mikser Vortex.
•
Zegar.
•
Cytometr przepływowy.
•
Oprogramowanie systemu stemCXP WYŁĄCZNIE do analizy automatycznej komórek kontrolnych Stem-Trol
Control Cells na cytometrach przepływowych FC 500 wyposażonych w oprogramowanie CXP.
PROCEDURA
W przypadku analizy automatycznej pełne instrukcje zawiera stemCXP System Guide (Przewodnik systemu
stemCXP) dostarczony z oprogramowaniem stemCXP System.
Analiza ręczna, patrz ulotka dołączona do opakowania odczynników Stem-Kit Reagents i następująca procedura.
UWAGA:
W celu standaryzowania analizy, po otrzymaniu nowych odczynników Stem-Kit
Reagents, a następnie codziennie, należy przeprowadzać kontrolę procesu przez
barwienie komórek kontrolnych Stem-Trol Control Cells za pomocą próbki prawidłowej
krwi obwodowej od zdrowego dawcy. Ponadto komórki kontrolne Stem-Trol Control
Cells to komórki stabilizowane (tj. nieżywotne), barwienie barwnikiem żywotności 7-AAD
Viability Dye może być wzrokowo sprawdzone na komórkach kontrolnych Stem-Trol
Control Cells (patrz nagłówek: Tworzenie histogramu).
Upewnić się, że cytometr przepływowy jest prawidłowo wyrównany i wystandaryzowany do intensywności
fluorescencji według wytycznych producenta i laboratoryjnych.
Upewnić się, że ustawienia kompensacji
fluorescencji są prawidłowo ustawione zgodnie z wytycznymi producenta i laboratoryjnymi.
Doprowadzić odczynnik kontrolny i przeciwciała do temperatury pokojowej.
Dla każdego analizatora oznaczyć jedną probówkę: TROL 45/34/7-AAD.
1. Pipetować 20 µL odczynnika CD45-FITC / CD34-PE do probówki.
2. Dodać do probówki 20 µL barwnika żywotności 7-AAD Viability Dye.
WAŻNE:
Jeżeli próbka krwi pozostaje na górze lub ściance probówki testowej, istnieje ryzyko
niepełnej lizy. Zachować ostrożność podczas pipetowania, aby nie dopuścić do
dotknięcia przez krew góry lub ścianek probówki testowej. W razie potrzeby oczyścić
probówkę wacikiem bawełnianym, aby usunąć wszystkie ślady próbki krwi z góry
i ścianek probówki testowej.
3. Na dno probówki dokładnie pipetować 100 µL dobrze wymieszanej prawidłowej próbki krwi pełnej używając
skalibrowanej pipety z dodatnim wypieraniem lub pipety powtarzalnej.
4. Przygotowanie i dodanie komórek kontrolnych Stem-Trol:
•
Worteksować komórki kontrolne Stem-Trol Controls Cells przez 5 sekund.
•
Dokładnie pipetować 20 µL komórek kontrolnych Stem-Trol Control Cells do probówki.
•
Worteksować probówki przez 5 sekund.
5. Inkubacja w temperaturze pokojowej (18–25°C) przez 20 minut, z zapewnieniem ochrony przed światłem.
6. Dodać 2 mL przygotowanego roztworu 1X NH
4
Cl Lysing Solution do probówki i natychmiast worteksować
przez 5 sekund.
Szczegóły przygotowywania roztworu Lysing Solution, patrz ulotka dołączona do opakowania odczynników
Stem-Kit Reagents.
7. Inkubacja w temperaturze pokojowej przez 10 minut, z zapewnieniem ochrony przed światłem.
8. Przechowywać probówki w statywie umieszczonym w lodzie (2–8°C) i zabezpieczonym przed światłem.
