B60231–AE
101 of 128
1. Гистограмма 1 — выполните назначение «H» гистограмме 1 для отображения всех событий, за
исключением всех Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres. См. руководство по инструменту для
создания «not gates. »
2. Гистограмма 2 — выполните назначение «A» гистограмме 2 для отображения всех событий CD45
+
.
3. Гистограмма 3 — выполните назначение «A» и «B» (AB) гистограмме 3 для отображения всех событий
CD45
+
CD34
+
.
4. Гистограмма 4 — выполните назначение «A», «B» и «C» гистограмме 4 для отображения всех
объединенных событий CD45
+
CD34
+
с низким или средним боковым рассеянием и низкой экспрессией
окрашивания CD45.
События из региона ABCD являются действительными гематопоэтическими
клетками-предшественниками CD34
+
.
5. Гистограмма 5 — без селектора для отображения всех событий.
6. Гистограмма 6 — выполните назначение «E» для отображения лимфоцитов как визуальную проверку
по дискриминатору.
7. Гистограмма 7 — выполните назначение «H» гистограмме 7, чтобы отобразить все Stem-Count или
Flow-Count Fluorospheres, включая дублеты.
8. Гистограмма 8 — выполните назначение «A» гистограмме 8 для отображения событий CD45
+
.
Настройка проточного цитометра
1. Убедитесь, что проточный цитометр надлежащим образом отрегулирован и стандартизирован
на световое рассеяние и интенсивность флуоресценции в соответствии с рекомендациями
производителя и лаборатории. Убедитесь, что настроена цветовая компенсация для стандартной
работы. Дополнительные инструкции см. в руководстве по инструменту.
2. Обработайте тестовые пробирки на вортексе в течение 5 секунд.
3. Выполните сбор данных на проточном цитометре. Следует проанализировать не менее 75 000 событий
CD45
+
.
4. Скорректируйте дискриминатор и регионы путем анализа пробирки TROL 45/34/7-AAD.
Пример анализа
Гистограммы, содержащиеся в ПРИЛОЖЕНИИ, отображаются в порядке возрастания номеров, как
показано в протоколе.
Расчет контрольных клеток CD34
+
Stem-Trol Control Cells
Использование результатов проточной цитометрии, автоматически скорректированных с аналитической
концентрацией Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres, полученных с использованием программного
обеспечения System II (версия 3.0) и проточного цитометра COULTER EPICS XL/XLMCL.
Чтобы получить автоматически рассчитываемые определения абсолютного количества на проточных
цитометрах COULTER EPICS XL / XL-MCL, необходимо ввести правильную аналитическую концентрацию
Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres до сбора пробы.
Введите «CAL» (Калибровка) как имя региона G синглетов Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres и
введите значение, например, 1000, в поле CAL FACTOR (Коэффициент калибровки) на экране диалогового
окна STATISTICS (Статистика) меню SET-UP SCREEN PROTOCOL (Протокол настройки экрана).
Ввод коэффициента калибровки для Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres:
1. На экране Acquisition Run (Прогон сбора) выберите Setup Screen (Настройка экрана) >> Protocol
(Протокол).
2. Выберите Statistics (Статистика) >> CAL FACTOR (Коэффициент калибровки).
3. Введите число коэффициента CAL (Калибровка) (аналитическая концентрация) из флакона
Stem-Count или Flow-Count Fluorospheres.
4. Нажмите ENTER (Ввод).
5. Выберите OKAY (ОК).
6. В строке введите «Y» (Да).
При сборе по меньшей мере 1000 синглетов флуоросфер абсолютное количество для контрольных клеток
Stem-Trol Control Cells CD34
+
автоматически корректируется и может быть взято непосредственно из
результатов распечатки статистики по региону D.
