B60231–AE
79 of 128
4. Histogram 4 — Przypisanie „A” i „B” i „C” (ABC) do Histogramu 4, aby wyświetlić wszystkie zgrupowane
zdarzenia CD45
+
CD34
+
z rozpraszaniem bocznym niskim do średniego i niską ekspresją barwienia CD45.
Zdarzenia z regionu ABCD są rzeczywistymi CD34
+
HPC.
5. Histogram 5 — Bez bramkowania w celu wyświetlenia wszystkich zdarzeń.
6. Histogram 6 — Przypisać „E” w celu wyświetlenia limfocytów jako kontroli wizualnej na dyskryminatorze.
7. Histogram 7 — Przypisać „H” do histogramu 7, aby wyświetlić wszystkie fluorokulki Stem-Count lub
Flow-Count Fluorospheres, w tym dublety.
8. Histogram 8 — Przypisać „A” do histogramu 8, aby wyświetlić zdarzenia CD45
+
.
Ustawienia cytometru przepływowego
1. Upewnić się, że cytometr przepływowy jest prawidłowo wyrównany i wystandaryzowany pod względem
rozpraszania światła i intensywności fluorescencji według wytycznych producenta i laboratoryjnych.
Zweryfikować, czy kompensacja koloru jest ustawiona dla pracy standardowej. Dodatkowe instrukcje, patrz
podręcznik analizatora.
2. Worteksować probówki testowe przez 5 sekund.
3. Przeprowadzić akwizycję danych na cytometrze przepływowym. Musi być przeanalizowane co najmniej
75 000 zdarzeń CD45
+
.
4. Dostosować dyskryminator i regiony analizując probówkę TROL 45/34/7-AAD.
Przykład analizy
Histogramy przedstawione w ZAŁĄCZNIKU są wyświetlane w kolejności, tak jak wyświetlane w protokole.
Obliczanie komórek kontrolnych CD34
+
Stem-Trol Control Cells
Przy użyciu wyników cytometrii przepływowej dostosowanych do oznaczonego stężenia fluorokulek Stem-Count
lub Flow-Count Fluorospheres uzyskanych przy użyciu oprogramowania System II (wersja 3.0) i cytometru
przepływowego COULTER EPICS XL/XLMCL.
W celu uzyskania automatycznie obliczonych oznaczeń liczb bezwzględnych na cytometrach przepływowych
COULTER EPICS XL / XL-MCL, przed akwizycją próbki należy wprowadzić prawidłowe stężenie oznaczane
fluorokulek Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres.
Wprowadzić „CAL” jako nazwę singletów fluorokulek Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres Regionu
G i wprowadzić wartość, na przykład 1000 do pola CAL FACTOR (WSPÓŁCZYNNIK KALIBRACJI) na ekranie
dialogowym STATISTICS (STATYSTYKA) menu SET-UP SCREEN PROTOCOL (EKRAN KONFIGURACJI
PROTOKOŁU).
Wprowadzenie współczynnika CAL dla fluorokulek Stem-Count lub Flow-Count Fluorospheres:
1. Na ekranie Acquisition Run (Przebieg akwizycji), wybrać Setup Screen (Ekran konfiguracji) >> Protocol
(Protokół).
2. Wybrać Statistics (Statystyka) >> CAL FACTOR (WSPÓŁCZYNNIK CAL).
3. Wprowadzić wartość współczynnika CAL (stężenie oznaczane) z fiolki fluorokulek Stem-Count lub Flow-Count
Fluorospheres.
4. Nacisnąć ENTER.
5. Wybrać OKAY (OK).
6. Po wyświetleniu monitu wybrać Y (Tak).
Po akwizycji przynajmniej 1000 singletów fluorokulek, liczba bezwzględna dla komórek kontrolnych CD34
+
Stem-Trol Control Cells jest dostosowywana automatycznie i może być uzyskana bezpośrednio z wyników
wydruku statystyk regionu D.
Tabela (poniżej):
Przykłady statystyk uzyskanych z probówką TROL 45/34/7-AAD w oprogramowaniu System II przy użyciu funkcji
CAL FACTOR (WSPÓŁCZYNNIK CAL), gdzie:
•
1024 to stężenie oznaczanych fluorokulek Stem-Count Fluorospheres.
•
5248 to całkowita liczba fluorokulek zgromadzonych w regionie CAL podczas okresu pełnej akwizycji.
W tym przykładzie wszystkie liczby są dostosowywane według: 1024/5248.
