B60231–AE
113 of 128
PIEZĪME.
Lai standartizētu analīzi, saņemot jaunus Stem-Kit reaģentus un katru dienu pēc tam veicot
procesa pārbaudi, iekrāsojiet Stem-Trol kontroles šūnas ar normālu perifēro asins paraugu no
veselīga donora. Tā kā Stem-Trol kontroles šūnas ir stabilizētas šūnas (t. i., dzīvotnespējīgas
šūnas), 7-AAD dzīvotspējas krāsvielu var vizuāli pārbaudīt ar Stem-Trol kontroles šūnām
(skatiet sadaļu Histogrammas izveide).
Nodrošiniet, ka plūsmas citometrs ir pareizi pielāgots un standartizēts fluorescences intensitātei saskaņā ar ražotāja un
laboratorijas pamatnostādnēm. Pārliecinieties, ka fluorescences kompensācijas iestatījumi ir pareizi pielāgoti atbilstoši
ražotāja un laboratorijas norādījumiem.
Paceliet temperatūru kontroles reaģentam un antivielai līdz istabas temperatūrai.
Katram eksperimentam marķējiet vienu stobriņu šādi: TROL 45/34/7-AAD.
1. Stobriņā pipetē 20 µl CD45-FITC/CD34-PE.
2. Pipetējiet stobriņā 20 µl 7-AAD dzīvotspējas krāsvielu.
SVARĪGI!
Nepilnīgas līzes risks, ja asins paraugs paliek testa stobriņa augšpusē vai uz testa stobriņa
malas. Pipetējot raugieties, lai asins nesaskartos ar testa stobriņa augšpusi vai malu. Ja
nepieciešams, notīriet testa stobriņu ar vates tamponu, lai no stobriņa augšpuses vai malas
noņemtu visas asins parauga atliekas.
3. Stobriņa apakšā precīzi pipetējiet 100 µl labi sajaukta normāla pilnasins parauga, izmantojot kalibrētu pozitīvo
maināmo uzgaļu virzuļpipeti vai atkārtotas dozēšanas pipeti.
4. Sagatavojiet un pievienojiet Stem-Trol, kā norādīts tālāk.
• Saskaliniet Stem-Trol kontroles šūnas 5 sekundes.
• Stobriņā precīzi pipetējiet 20 µl Stem-Trol kontroles šūnas.
• Samaisiet ar virpuļveida kustībām 5 sekundes.
5. Inkubējiet istabas temperatūrā (18–25 °C) 20 minūtes, sargājot no gaismas.
6. Pievienojiet stobriņam 2 ml sagatavota 1X NH
4
Cl līzēšanas šķīduma un nekavējoties samaisiet ar virpuļveida kustībām
5 sekundes.
Plašāku informāciju par līzēšanas šķīduma sagatavošanu skatiet Stem-Kit reaģentu lietošanas instrukcijā.
7. Inkubējiet istabas temperatūrā 10 minūtes, sargājot no gaismas.
8. Uzglabājiet stobriņus statīvā, kas novietots uz ledus (2–8 °C), un sargājiet no gaismas.
SVARĪGI!
Kļūdainu rezultātu risks, ja tiek pipetēti gaisa burbuļi. Pārmērīga Stem-Count vai Flow-Count
fluorosfēru sajaukšana var radīt gaisa burbuļus. Pārmērīgi nesajauciet Stem-Count vai
Flow-Count fluorosfēras un nepipetējiet gaisa burbuļus parauga stobriņos.
9. Pirms lietošanas uzmanīgi samaisiet Stem-Count vai Flow-Count fluorosfēras, apvēršot flakonu 3 līdz 5 reizes. Lai
samazinātu gaisa burbuļu veidošanos, izvairieties no pārmērīgas maisīšanas.
10. Pirms iegūšanas stobriņā pipetējiet 100 µl Stem-Count vai Flow-Count fluorosfēru.
11. Uzreiz pēc katras papildināšanas 5 sekundes enerģiski saskaliniet.
Uzglabāt 2–8 °C temperatūrā.
Atkārtojiet
saskalināšanu tieši pirms plūsmas citometriskās iegūšanas.
SVARĪGI!
Kļūdainu rezultātu risks, ja paraugs tiek analizēts vairāk nekā 1 stundu pēc Stem-Count vai
Flow-Count fluoresfēru pievienošanas. Sagatavotie paraugi ar plūsmas citometru jāanalizē
1 stundas laikā pēc Stem-Count vai Flow-Count fluorosfēru pievienošanas.
Sagatavošanas kopsavilkums (stobriņa etiķete: TROL45/34/7-AAD)
Reaģenti un paraugi
Tilpums
CD45-FITC / CD34-PE
20 µl
7-AAD dzīvotspējas krāsviela
20 µl
Pilnasins
100 µl
Stem-Trol Control Cells
20 µl
Jāveic virpuļveida maisīšana — jāveic inkubēšana istabas temperatūrā 20 minūtes. Sargājiet
no gaismas
