B60231–AE
106 of 128
PROCEDURĂ
Pentru analize automate, consultați documentul stemCXP System Guide (Ghidul de utilizare a sistemului stemCXP) furnizat
împreună cu software-ul stemCXP System pentru instrucțiuni complete.
Pentru analize manuale, consultați prospectul produsului Stem-Kit Reagents și procedura următoare.
OBSERVAŢIE:
Pentru a standardiza analiza, atunci când primiți Stem-Kit Reagents noi și apoi la intervale
zilnice executați o verificare a procesului colorând Stem-Trol Control Cells cu o probă de sânge
periferic normal de la un donor sănătos.Mai mult, deoarece Stem-Trol Control Cells sunt celule
stabilizate (adică celule neviabile), colorantul pentru teste de viabilitate celulară 7-AAD poate
fi verificat vizual pentru Stem-Trol Control Cells (consultați secțiunea: Crearea histogramei).
Asigurați-vă că sistemul de citometrie de flux este corect aliniat și standardizat pentru intensitatea de fluorescență,
conform instrucțiunilor producătorului și laboratorului. Asigurați-vă că setările de compensare a fluorescenței sunt
ajustate corect, conform instrucțiunilor producătorului și laboratorului.
Aduceți reactivul și anticorpii de control la temperatura camerei.
Pentru fiecare experiment, etichetați o eprubetă cu: TROL 45/34/7-AAD.
1. Pipetați 20 µl de CD45-FITC / CD34-PE în eprubetă.
2. Pipetați în eprubetă 20 µl de colorant pentru teste de viabilitate celulară 7-AAD.
IMPORTANT:
Există risc de lizare incompletă dacă rămâne specimen de sânge pe partea de sus sau pe
lateralul eprubetei de test. Aveți grijă când pipetați pentru a împiedica sângele să atingă
partea de sus sau lateralul eprubetei de test. Curățați eprubeta cu un tampon din bumbac,
dacă este cazul, pentru a elimina toate urmele de specimen de sânge din partea de sus sau
lateralul eprubetei de test.
3. În partea de jos a eprubetei, pipetați corect 100 µl dintr-o probă de sânge integral normal bine amestecat, folosind
o pipetă calibrată corespunzător sau o pipetă repetoare.
4. Preparați și adăugați Stem-Trol:
• Omogenizați Stem-Trol Control Cells timp de 5 secunde.
• Pipetați cu precizie 20 µl de Stem-Trol Control Cells în eprubetă.
• Omogenizați eprubetele timp de 5 secunde.
5. Incubați la temperatura camerei (18–25°C) timp de 20 de minute, departe de lumină.
6. Adăugați 2 ml de soluție de lizare preparată 1X NH
4
Cl Lysing Solution în eprubetă și omogenizați imediat timp de
5 secunde.
Pentru detalii referitoare la prepararea soluției de lizare, consultați prospectul produsului Stem-Kit Reagents.
7. Incubați la temperatura camerei timp de 10 minute, departe de lumină.
8. Depozitați eprubetele într-un stativ plasat pe gheață (2–8°C), departe de lumină.
IMPORTANT:
Există riscul unor rezultate eronate dacă sunt pipetate bule de aer. Amestecarea excesivă a
Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres poate crea bule de aer. Nu amestecați excesiv
Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres și nu pipetați bule de aer în eprubetele de test.
9. Amestecați ușor Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres răsturnând fiola de 3-5 ori înainte de utilizare. Evitați
amestecarea excesivă, pentru a reduce formarea bulelor de aer.
10. Înainte de achiziție, pipetați în eprubetă 100 µl de Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres.
11. Omogenizați imediat timp de 5 secunde după fiecare adăugire. Depozitați la 2–8°C. Repetați omogenizarea imediat
înainte de achiziția citometriei de flux.
IMPORTANT:
Există riscul obținerii unor rezultate eronate dacă proba este analizată la mai mult de 1
oră după adăugarea Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres. Probele preparate trebuie
analizate în interval de 1 oră după adăugarea Stem-Count sau Flow-Count Fluorospheres.
