B60231–AE
47 of 128
•
stemCXP-systemsoftware
er
KUN
til
automatiseret
analyse
af
Stem-Trol
Control
Cells
på
FC 500-flowcytometre udstyret med CXP-software.
PROCEDURE
For automatisk analyse, se stemCXP System Guide (stemCXP-systemvejledningen), som følger med
stemCXP-softwarekittet for komplette instruktioner.
For manuel analyse, se indlægssedlen til Stem-Kit Reagents og følgende fremgangsmåde.
BEMÆRK:
For at standardisere analysen skal der køres en proces, når der modtages nye Stem-Kit
Reagents og herefter dagligt, ved at farve Stem-Trol Control Cells med en normal perifer
blodprøve fra en sund donor. Fordi Stem-Trol Control Cells er stabiliserede celler (dvs.
ikke-brugbare celler), kan farvning med 7-AAD Viability Dye kontrolleres visuelt på
Stem-Trol Control Cells (se overskriften: Oprettelse af histogram).
Sørg for, at flowcytometeret er korrekt justeret og standardiseret til fluorescensintensiteten i henhold til
producentens og laboratoriets retningslinjer. Sørg for, at indstillingerne for fluorescenskompensation er justeret
korrekt i henhold til producentens og laboratoriets retningslinjer.
Lad kontrolreagenset og antistofferne nå rumtemperatur.
Sæt en etikette på hvert prøverør for hvert eksperiment: TROL 45/34/7-AAD.
1. Pipettér 20 µL CD45-FITC/CD34-PE ned i prøverøret.
2. Pipettér 20 µL 7-AAD Viability Dye ned i prøverøret.
VIGTIGT:
Der er risiko for mangelfuld lysering, hvis blodpræparatet forbliver øverst i eller på siden
af prøverøret. Vær forsigtig ved pipettering for at undgå, at blodet kommer i kontakt med
prøverørets top eller side. Rengør prøverør med en vatpind, hvis det er nødvendigt, for
at fjerne alle spor af blodpræparatet fra prøverørets top eller side.
3. Pipettér nøjagtigt 100 µL velblandet prøve af normalt helblod ved hjælp af en kalibreret positiv pipette til
overførsel eller pipette til gentagelse ned i bunden af prøverøret.
4. Klargør og tilføj Stem-Trol:
•
Vortex Stem-Trol Control Cells i 5 sekunder.
•
Pipettér nøjagtigt 20 µL Stem-Trol Control Cells ned i prøverøret.
•
Vortex-prøverør i 5 sekunder.
5. Inkuber i mørke ved stuetemperatur (18-25 °C) i 20 minutter.
6. Tilsæt 2 mL af klargjort 1X NH
4
Cl Lysing Solution i prøverøret og vortex med det samme i 5 sekunder.
Se indlægssedlen til Stem-Kit Reagents for oplysninger om klargøring af lyseringsopløsningen.
7. Inkuber i mørke ved stuetemperatur i 10 minutter.
8. Opbevar prøverørene i et stativ anbragt på is (2-8 °C) og beskyttet mod lys.
VIGTIGT:
Der er risiko for fejlagtige resultater, hvis der pipetteres luftbobler. Overdreven blanding
af Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres kan danne luftbobler. Undlad at blande
Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres for meget, og undlad at pipettere luftbobler
ned i prøverørene.
9. Bland forsigtigt Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres ved at vende prøveglasset 3 til 5 gange før brug.
Undgå overdreven blanding for at minimere dannelsen af luftbobler.
10.Før hentning, pipetteres 100 µL Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres over i prøverøret.
11. Vortex i 5 sekunder med det samme efter tilførsel. Opbevar ved 2-8 °C. Gentag vortex med det samme før
hentning med flowcytometer.
VIGTIGT:
Der er risiko for fejlagtige resultater, hvis prøven analyseres mere end 1 time
efter tilsætning af Stem-Count eller Flow-Count Fluorospheres. Forberedte prøver
skal analyseres inden for 1 time efter tilsætning af Stem-Count eller Flow-Count
Fluorospheres.
