B60231–AE
61 of 128
Προετοιμασία αντιδραστηρίου
Το Stem-Trol Control Cells είναι ένα αιώρημα κυττάρων που είναι έτοιμο για χρήση. Απαιτείται σωστή ανάμιξη
(περιδίνηση επί 10–12 δευτερόλεπτα) πριν από κάθε πρώτη μετάγγιση από το φιαλίδιο.
Αποφεύγετε την
υπερβολική ανάμιξη ώστε να περιοριστεί ο σχηματισμός φυσαλίδων αέρα. Μην αναρροφάτε φυσαλίδες αέρα.
ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ ΠΟΥ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ
•
Απιονισμένο νερό.
•
Stem-Kit Reagents (REF IM3630) με χρωστική βιωσιμότητας 7-AAD.
•
Εναλλακτικά, αντί των Stem-Count Fluorospheres: Flow-Count Fluorospheres (REF 7547053)
•
Παγόλουτρο.
•
Πλαστικοί σωλήνες αιμόλυσης (12 x 75 mm).
•
Βαθμονομημένη πιπέτα θετικού εκτοπίσματος (20 µL, 100 µL, 2 mL) και ρύγχη ή βαθμονομημένη
επαναληπτική πιπέτα (20 µL, 100 µL, 2 mL) και ρύγχη.
•
Βαθμονομημένες τυπικές πιπέτες (20 µL, 100 µL, 2 mL) και ρύγχη.
•
Αναδευτήρας τύπου vortex.
•
Χρονόμετρο.
•
Κυτταρομετρητής ροής.
•
Λογισμικό συστήματος stemCXP ΜΟΝΟ για αυτοματοποιημένη ανάλυση του Stem-Trol Control Cells σε
κυτταρόμετρα ροής FC 500 που διαθέτουν το λογισμικό CXP.
ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ
Για αυτόματη ανάλυση, ανατρέξτε στο stemCXP System Guide (Οδηγός συστήματος stemCXP) που παρέχεται με
το λογισμικό συστήματος stemCXP, για ολοκληρωμένες οδηγίες.
Για μη αυτόματη ανάλυση, ανατρέξτε στο ένθετο συσκευασίας των Stem-Kit Reagents και στην ακόλουθη
διαδικασία.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ:
Για την τυποποίηση της ανάλυσης, όταν λαμβάνετε νέα Stem-Kit Reagents, και
έπειτα σε ημερήσια βάση, εκτελείτε έναν έλεγχο της διαδικασίας υποβάλλοντας σε
χρώση το Stem-Trol Control Cells και χρησιμοποιώντας ένα φυσιολογικό δείγμα
περιφερικού αίματος από υγιή δότη. Επιπλέον, καθώς το Stem-Trol Control Cells είναι
σταθεροποιημένα κύτταρα (δηλ. μη βιώσιμα κύτταρα), μπορείτε να ελέγχετε οπτικά τη
χρώση με χρωστική βιωσιμότητας 7-AAD στο Stem-Trol Control Cells (βλ. ενότητα:
Δημιουργία ιστογράμματος).
Εξασφαλίστε ότι το κυτταρόμετρο ροής είναι σωστά ευθυγραμμισμένο και τυποποιημένο για την ένταση φθορισμού
σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες του κατασκευαστή και του εργαστηρίου. Διασφαλίστε ότι οι ρυθμίσεις
αντιστάθμισης φθορισμού είναι σωστές σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες του κατασκευαστή και του
εργαστηρίου.
Αφήστε το αντιδραστήριο μάρτυρα και τα αντισώματα να σταθεροποιηθούν σε θερμοκρασία δωματίου.
Για κάθε πείραμα, τοποθετήστε σε ένα σωληνάριο την ετικέτα: TROL 45/34/7-AAD.
1. Μεταγγίστε με πιπέτα 20 µL CD45-FITC / CD34-PE στο σωληνάριο.
2. Μεταγγίστε με πιπέτα 20 µL χρωστικής βιωσιμότητας 7-AAD στο σωληνάριο.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ:
Υπάρχει κίνδυνος ατελούς λύσης εάν το δείγμα αίματος παραμείνει στο άνω ή το
πλαϊνό τμήμα του δοκιμαστικού σωληναρίου. Να είστε προσεκτικοί όταν χρησιμοποιείτε
την πιπέτα, ώστε το αίμα να μην έρθει σε επαφή με το άνω ή το πλαϊνό τμήμα του
δοκιμαστικού σωληναρίου. Καθαρίστε το σωληνάριο με έναν βαμβακοφόρο στειλεό,
εάν χρειάζεται, για να αφαιρέσετε όλα τα ίχνη του δείγματος αίματος από το άνω ή το
πλαϊνό τμήμα του δοκιμαστικού σωληναρίου.
3. Μεταγγίστε με ακρίβεια 100 µL καλά αναμεμιγμένου δείγματος ολικού αίματος, στο κάτω τμήμα του
σωληναρίου, χρησιμοποιώντας μια βαθμονομημένη πιπέτα θετικού εκτοπίσματος ή επαναληπτική πιπέτα.
4. Παρασκευάστε και προσθέστε το Stem-Trol:
•
Περιδινήστε το Stem-Trol Control Cells για 5 δευτερόλεπτα.
