B60231–AE
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Configuração do citómetro de fluxo
1. Certifique-se de que o citómetro de fluxo está devidamente alinhado e normalizado em termos de dispersão da
luz e intensidade de fluorescência de acordo com as recomendações do fabricante e do laboratório. Verifique
se a compensação de cor está configurada para funcionamento normal. Consulte o manual do instrumento
para obter instruções adicionais.
2. Misture os tubos de ensaio durante 5 segundos.
3. Efetue a aquisição de dados no citómetro de fluxo. Devem ser analisados, no mínimo, 75 000 eventos CD45
+
.
4. Ajuste o discriminador e as regiões analisando o tubo de amostra TROL 45/34/7-AAD.
Exemplo de Análise
Os histogramas mostrados no ANEXO são apresentados em ordem numérica ascendente conforme apresentado
no protocolo.
Cálculo de Stem-Trol Control Cells CD34
+
Utilizando os resultados de citometria de fluxo ajustados automaticamente com a concentração ensaiada de
Stem-Count Fluorospheres ou Flow-Count Fluorospheres obtida com a utilização do software System II (Versão
3.0) e um citómetro de fluxo COULTER EPICS XL/XLMCL.
Para obter determinações de contagens absolutas calculadas automaticamente em citómetros de fluxo
COULTER EPICS XL / XL-MCL, deve introduzir-se a concentração ensaiada correta de Stem-Count
Fluorospheres ou Flow-Count Fluorospheres antes da aquisição de amostras.
Introduza «CAL» (Calibração) como o nome da Região G de singletos de Stem-Count Fluorospheres ou
Flow-Count Fluorospheres e introduza um valor de, por exemplo, 1000 na caixa CAL FACTOR (Fator de
calibração) no ecrã de diálogo STATISTICS (Estatísticas) do menu SET-UP SCREEN PROTOCOL (Protocolo de
ecrã de configuração).
Introduzir o CAL Factor (Fator de calibração) para Stem-Count Fluorospheres ou Flow-Count Fluorospheres:
1. No ecrã Acquisition Run (Execução de aquisição), selecione Setup Screen (Ecrã de configuração) >> Protocol
(Protocolo).
2. Selecione Statistics (Estatísticas) >> CAL FACTOR (Fator calibração).
3. Introduza o número de fator CAL (concentração ensaiada) do recipiente de Stem-Count Fluorospheres ou
Flow-Count Fluorospheres.
4. Prima ENTER.
5. Selecione OK.
6. Na mensagem de opções, digite Y para sim.
Quando são adquiridos pelo menos 1000 singletos de fluoroesferas, a contagem absoluta de Stem-Trol Control
Cells CD34
+
é ajustada automaticamente e pode ser obtida diretamente dos resultados impressos de estatísticas
da Região D.
Tabela (abaixo):
Exemplo de estatísticas obtidas com tubo de amostra TROL 45/34/7-AAD no software System II utilizando a função
CAL FACTOR (Fator calibração), em que:
•
1024 é a concentração ensaiada de Stem-Count Fluorospheres.
•
5248 é o número total de fluoroesferas acumuladas na região CAL (Calibração) durante o tempo de aquisição
total.
Neste exemplo, todas as contagens são ajustadas por: 1024/5248.
Estatísticas:
histograma não
normalizado
Delimitação de
lista: ID de região
desativado
Contagens
ajustadas
(células/µL)
1
A
LEUKS
9798
2
B
CD34 POS
279
3
C
CD45 DIM
264
4
D
Stem-Trol Control
Cells
248
