B60231–AE
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Estadística:
Histograma no
normalizado
Listgating: ID de la
región inhabilitada
Ajuste de recuentos
(Cel/µL)
3
C
CD45 DIM
264
4
D
Stem-Trol Control
Cells
248
7
G
CAL 1024
1024
5
H
Todas las
Stem-Count
Fluorospheres
1046
1. Registre los recuentos absolutos ajustados (cel/µL) en las Regiones D de los tubos de muestra TROL
45/34/7-AAD.
.
Ejemplo:
.
El tubo de muestra TROL 45/34/7-AAD: Stem-Trol Control Cells = 248 cel/µL.
2. Multiplicar este recuento exacto por el factor de normalización (N) = 5.
.
NOTA:
.
Es necesario normalizar el recuento absoluto de las Stem-Trol Control Cells en relación con volúmenes adicionados
durante la prueba: determine N dividiendo el volumen de la referencia de recuento (los singletes de las Stem-Count
Fluorospheres) por el volumen de las Stem-Trol Control Cells agregadas al tubo de muestra.
.
..
Ejemplo:
.
se añaden 100 µL de Stem-Count Fluorospheres a 20 µL de Stem-Trol Control Cells.
.
N = 100 ÷ 20 = 5
.
El recuento absoluto de las Stem-Trol Control Cells normalizadas = 248 x 5 = 1240 cel/µL.
3. Verifique el recuento absoluto de las Stem-Trol Control Cells obtenido comparando dicho recuento con las
Stem-Trol Control Cells.
Concentración ensayada (cel/µL) señalada en la etiqueta del vial. El recuento absoluto de las Stem-Trol
Control Cells obtenido debe oscilar en un rango aproximado del 15 % de la concentración ensayada de las
Stem-Trol Control Cells. El método de tinción y el proceso de lisis son válidos en estos momentos.
.
Ejemplo:
.
La concentración ensayada de Stem-Trol Control Cells = 1380 cel/µL.
.
Rango de los valores aceptados: 1173–1587 (1380 ± 207) cel/µL
.
El recuento absoluto normalizado = 1240 cel/µL está dentro del rango.
.
..
IMPORTANTE:
.
Si la medida del recuento absoluto de las Stem-Trol Control Cells se encuentra fuera del intervalo de los valores
aceptados, determine si el pipeteado se efectuó de manera correcta, particularmente para las Stem-Count o Flow-Count
Fluorospheres y las Stem-Trol Control Cells. Compruebe visualmente los reportes del citómetro de flujo y la calidad de
los procesos de tinción y de lisado en los tubos de muestra. Verifique la forma en que se establecieron los contornos
de la región. Repita la preparación en otros tubos de muestra, en caso necesario. Efectúe la adquisición y analice
tanto los tubos de muestra nuevos como los utilizados previamente. Compare los dos resultados. Si no concuerdan,
contacte a un representante local de Beckman Coulter.
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