helena BioSciences SAS-1 Immunofix Instructions For Use Manual Download

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Instructions For Use

SAS-1 Immunofix

Cat. No. 200300

SAS-1 Immunofix
Fiche technique
Réf. 200300

SAS-1 Immunofixation
Anleitung
Kat. Nr. 200300

SAS-1 Immunofissazione
Istruzioni per l’uso
Cod. 200300

SAS-1 Inmunofijación
Instrucciones de uso
No de catálogo 200300

helena

www.helena-biosciences.com

BioSciences

Europe

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Page 1: ... 200300 SAS 1 Immunofixation Anleitung Kat Nr 200300 SAS 1 Immunofissazione Istruzioni per l uso Cod 200300 SAS 1 Inmunofijación Instrucciones de uso No de catálogo 200300 helena www helena biosciences com BioSciences Europe Contents English 1 Français 9 Deutsch 17 Italiano 26 Español 35 ...

Page 2: ......

Page 3: ...on of electrophoretic separation of urine proteins coupled to the identification of specific protein types by immunoprecipitation allows the differentiation of several types of proteinuria Physiological Glomerular selective and non selective Tubular and proteinuria associated with Dysglobulinaemias 1 5 Alfonso first described immunofixation in the literature in 1964 6 Alper and Johnson published a...

Page 4: ...ng drying of the gel or 3 visible contamination of the agarose from bacterial or fungal sources 2 Acid Violet Stain The stain concentrate should be stored at 15 30 C and is stable until the expiry date indicated on the label Diluted stain solution is stable for 6 months at 15 30 C It is recommended to discard used stain immediately to prevent depletion of staining capability Poor staining performa...

Page 5: ...e Pentavalent 2ml Cat No 9249 Antiserum to Human IgD Cat No 9250 Antiserum to Human IgE Cat No 9400 IFE Control Kit SAMPLE COLLECTION AND PREPARATION Freshly collected serum is the specimen of choice Samples can be stored at 15 30 C for up to 4 days 2 6 C for up to 2 weeks or 6 months at 20 C 6 Urine samples should be applied neat Serum samples should be diluted according to the following table us...

Page 6: ...ep 1 8 mins 37 C incubate Incubation Step 2 8 mins 40 C D blot i ii ii i S SA AS S 3 3 u us se er rs s Step Time mm ss Temperature C Voltage Other Load Sample 00 30 21 Speed 1 Apply Sample 00 30 21 Speed 1 Electrophoresis 17 00 21 100 Apply antisera 10 00 21 Insert Combs 02 00 21 Blotter D 05 00 40 Dry 08 00 54 Use Location 2 N NO OT TE E 1 1 For Serum immunofixation 1 sample application is requir...

Page 7: ...d place on a blotter D agarose side up Place a blotter B wetted in wash solution onto the surface of the gel followed by a blotter D Press the gel for 3 minutes i ii i S SA AS S 1 1 P Pl lu us s a an nd d S SA AS S 3 3 u us se er rs s Remove the gel blocks using the Gel Block Remover Go to Step 16 15 i i S SA AS S 1 1 u us se er rs s Remove the blotters NOTE Immediately after use clean the antiser...

Page 8: ...ge polyclonal immunoglobulin presence also The publication Immunofixation for the Identification of Monoclonal Gammopathies is available from Helena BioSciences on request Urine Immunofixation Type of Proteinuria Bands Observed On Gel Proteins Present Normal urine Small albumin band albumin Glomerular Albumin alpha 1 albumin alpha 1 beta gamma antitrypsin transferrin gamma globulins Tubular alpha ...

Page 9: ...stituting IgD and IgE antisera for two of the other heavy chain antisera Failure to obtain a reaction with IgD or IgE antisera would be indicative of free light chain disease 4 Band In Gamma Region Showing No Reactivity With IFE Antisera C Reactive Protein CRP may be detected in patients with acute inflammatory response 12 13 CRP appears as a narrow band at the cathodic end of the serum protein pa...

Page 10: ... the Detection of Bence Jones Proteinuria Ann Clin Biochem 1997 34 371 374 6 Afonso E Quantitation Immunoelectrophoresis of Serum Proteins Clin Chim Acta 1964 10 114 122 7 Alper C A and Johnson A M Immunofixation Electrophoresis A Technique for the Study of Protein Polymorphism Vox Sang 1969 17 445 452 8 Alper C A Genetic Polymorphism of Complement Components as a Probe of Structure and Function P...

Page 11: ...litative et quantitative du type et de la quantité des protéines excrétées 1 5 La combinaison de l électrophorèse urinaire couplée à l identification spécifique du type des protéines par immunoprécipitation permet la différentiation de plusieurs types de protéinurie Physiologique Glomérulaire sélective et non sélective Tubulaire et protéinurie associée à une Dysglobulinémie 1 5 Alfonso fut le prem...

Page 12: ...n du gel 1 cristaux visibles indiquant que le gel a été congelé 2 de craquelures témoins d une déshydratation du gel 3 une contamination visible bactérienne ou fongique 2 Colorant Acide Violet Le colorant concentré doit être conservé entre 15 30 C il est stable jusqu à la date de péremption indiquée sur l étiquette Le colorant reconstitué est stable 6 mois entre 15 30 C Il est recommandé de rejete...

Page 13: ...S L utilisation de sérums fraîchement prélevés est fortement recommandée Les échantillons peuvent être conservés 4 jours à 15 30 C 2 semaines à 2 6 C ou 6 mois à 20 C 6 Les échantillons urinaires doivent être déposés purs Les échantillons sériques doivent être dilués à l aide du diluant selon la table ci dessous Concentration monoclonal Case SP G A M κ λ 3 g L 1 2 Pur 3 10 g L 1 2 1 4 10 25 g L 1 ...

Page 14: ...r rs s S SA AS S 3 3 encoches A et 10 6 Lancer l électrophorèse des Immunofix i i P Po ou ur r l le es s u ut ti il li is sa at te eu ur rs s S SA AS S 1 1 80 Volts 20 minutes i ii i P Po ou ur r l le es s u ut ti il li is sa at te eu ur rs s S SA AS S 1 1 P Pl lu us s L électrophorèse 100 Volts 18 minutes 22 C Incubation l étape 1 8 minutes 37 C Incubation Incubation l étape 2 8 minutes 40 C D sé...

Page 15: ...S S 1 1 P Pl lu us s e et t S SA AS S 3 3 Retirer le buvard 14 P Po ou ur r l le es s u ut ti il li is sa at te eu ur rs s S SA AS S 1 1 Sortir le gel de la solution de lavage et le placer sur un buvard D agarose vers le haut Déposer un buvard B imbibé de solution saline sur le gel puis par dessus un buvard D Presser pendant 3 minutes P Po ou ur r l le es s u ut ti il li is sa at te eu ur rs s S S...

Page 16: ... même position et avoir la même forme que la bande anormale du protéinogramme La protéine anormale est identifiée par les antiséra avec lesquelles elle a réagi Dans le cas de faible concentration d une protéine anormale celle ci peut apparaître comme une bande dans un environnement d immunoglobuline polyclonale normal Un bande peut aussi être détectée dans un bruit de fond polyclonal lorsqu il y a...

Page 17: ... éliminer cette réaction non spécifique Mélanger 190µL de dilution d échantillon avec 10µL de 1 DTT en solution saline ou mélanger 100µL de sérum pur avec 10µL de solution au 1 10 de β 2 mercaptoéthanol en solution Réaliser l IFE normalement N NO OT TE E Toujours travailler sous hotte avec le β 2 mercaptoéthanol c Fibrinogène Si le fibrinogène est présent dans l échantillon il peut apparaître sous...

Page 18: ...breit A and Wiedemann G Determination of Urinary Protein Fractions A Comparison With Different Electrophoretic Methods and Quantitatively Determined Protein Concentrations Clin Chim Acta 2000 297 163 172 4 Wiedemann G and Umbreit A Determination of Urinary Protein Fractions by Different Electrophoretic Methods Clin Lab 1999 45 257 262 5 Wong W K Wieringa G E Stec Z Russell J Cooke S Keevil B G and...

Page 19: ...on anormalen Plasmaproteinen im Urin ist bei der Beurteilung der Nierenfunktion von großer Bedeutung Studien der Proteinurie sollten quantitative und qualitative Untersuchungen von Typ und Menge der ausgeschiedenen Proteine umfassen 1 5 Die Kombination der elektrophoretischen Auftrennung von Urin Proteinen mit der Immunpräzipitation erlaubt die Unterteilung mehrerer Proteinurieformen physiologisch...

Page 20: ...it enthält eine Methodenbeschreibung sowie ausreichend Blotter C D und kämme für 10 Gele LAGERUNG UND STABILITÄT 1 SAS 1 IFE Gel Gele sollten bei 15 30 C gelagert werden und sind bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil NICHT IM KüHLSCHRANK ODER TIEFKüHLSCHRANK AUFBEWAHREN Der Verfall des Gels zeigt sich durch 1 Kristallisation die auf ein Einfrieren des Gels hindeutet 2 Brüchigkeit und Abblätte...

Page 21: ...ane Urin Mikroproteine 2ml Kat Nr 220300 Antiserum gegen humane Urin Makroproteine 2ml Kat Nr 220400 Antiserum gegen humane GAM Proteine 2ml Kat Nr 220700 Antiserum gegen humane freie und gebundene Kappa Leichtketten 2ml Kat Nr 220800 Antiserum gegen humane freie und gebundene Lambda Leichtketten 2ml Kat Nr 220500 Antiserum gegen humane freie Kappa Leichtketten 2ml Kat Nr 220600 Antiserum gegen hu...

Page 22: ...ter ausrichten Darauf achten dass unter dem Gel keine Luftblasen sind 3 Blotten Sie die Geloberfläche mit einem Blotter C und verwerfen Sie den Blotter anschlieflend 4 i i N Nu ur r f fü ür r S SA AS S 1 1 Befestigen Sie die Elektroden oben auf den Elektrodenhaltern damit sie mit den Pufferblöcken in Kontakt sind i ii i N Nu ur r f fü ür r S SA AS S 1 1 P Pl lu us s wie oben Die Abdeckung über Gel...

Page 23: ...ten ein Entwicklungsgewicht benutzen N Nu ur r f fü ür r S SA AS S 1 1 P Pl lu us s u un nd d S SA AS S 3 3 Legen Sie einen Blotter D glatte Seite nach unten auf das Gel und bringen Sie die Antiserumschablone wieder an damit der Blotter flach aufliegt Blotten Sie das Gel 13 N Nu ur r f fü ür r S SA AS S 1 1 Entfernen Sie die Blotter und waschen Sie das Gel vorsichtig 4 Minuten lang in einer Waschf...

Page 24: ...rben Entfärben und Waschen und einen Trockner mit Gebläseluft bei 60 70 C für das Trocknen 18 Am Ende des Färbevorgangs nehmen Sie das Gel aus der Färbekammer heraus Das Gel ist jetzt prüfbereit INTERPRETATION DER ERGEBNISSE Die meisten monoklonalen Proteine wandern zur Kathode oder in den Gammabereich des Eiweiflmusters Sie können allerdings aufgrund ihrer pathologischen Eigenschaften während der...

Page 25: ...n Immunglobulinreihen Gelegentlich zeigt eine fertige IFE Platte eine Ausfällungsbande an der gleichen Stelle in jedem Muster über die Platte verteilt Die Ursache dafür ist a IgM monoklonale Immunglobuline IgM monoklonale Proteine können sich an die Gel Matrix anheften Als Folge davon erscheint eine Bande in fünf Antiserumreihen des Gels Wo die Bande allerdings mit einem spezifischen Antiserum für...

Page 26: ...Punkt der Probenauftragung Diese kann durch Chylomikronen im Serum oder aber durch ausgefallenes Eiweiß in Proben die gefroren gelagert wurden verursacht sein 5 Keine Reaktion mit Kappa und Lambda Antiseren Gelegentlich reagiert eine Probe mit dem Antiserum einer schweren Kette wenn keine Reaktion mit einer leichten Kette erkennbar ist In dieser Situation muss folgendes ausgeschlossen werden a Sch...

Page 27: ...1964 10 114 122 7 Alper C A and Johnson A M Immunofixation Electrophoresis A Technique for the Study of Protein Polymorphism Vox Sang 1969 17 445 452 8 Alper C A Genetic Polymorphism of Complement Components as a Probe of Structure and Function Progress in Immunology First International Congress of Immunology 1971 609 624 Academic Press New York 9 Johnson A M Genetic Typing of Alpha 1 Antitrypsin ...

Page 28: ...one elettroforetica delle proteine urinarie abbinata all identificazione di tipi specifici di proteine attraverso immunoprecipitazione permette la differenziazione di diversi tipi di proteinuria fisiologica glomerulare selettiva e non selettiva tubulare e proteinuria associata a disglobulinemie 1 5 Alfonso è stato il primo a descrivere l immunofissazione in letteratura nel 1964 6 Alper e Johnson p...

Page 29: ...nazione dell agarosio da parte di batteri o funghi sporigeni 2 Colorante Acido Blu Il colorante concentrato deve essere conservato a 15 30 C ed é stabile fino alla data riportata sull etichetta Il colorante ricostituito é stabile per 6 mesi se conservato a 15 30 C Scartare immediatamente il colorante utilizzato La scarsa colorazione può indicare un deterioramento 3 Soluzione decolorante Il decolor...

Page 30: ...00 Antisiero Catene Kappa libere e legate 2ml Cod 220800 Antisiero Catene Lambda libere e legate 2ml Cod 220500 Antisiero Catene Kappa libere 2ml Cod 220600 Antisiero Catene Lambda libere 2ml Cod 220900 Antisiero Urine Pentavalente Albumina 2ml Cod 221000 Antisiero Urine Pentavalente 2ml Cod 9249 Antisiero IgD Cod 9250 Antisiero IgE Cod 9400 Controllo IFE RACCOLTA E PREPARAZIONE DEL CAMPIONE Si co...

Page 31: ...ciugare la superficie del gel con un blotter C poi scartarlo 4 i i S So ol lo o p pe er r S SA AS S 1 1 Posizionare gli elettrodi nella parte superiore dei blocchi magnetici in modo da creare un contatto con I ponti i ii i S So ol lo o p pe er r S SA AS S 1 1 P Pl lu us s come sopra Sistemare il coperchio sul gel e sugli elettrodi e premere con decisione per 5 secondi per consentire il contatto i ...

Page 32: ...ito in soluzione de lavaggio sulla superficie del gel e subito dopo un blotter X Premere il gel usare il Peso di Sviluppo per 10 minuti i ii i S So ol lo o p pe er r S SA AS S 1 1 P Pl lu us s e e S SA AS S 3 3 Collocare un blotter D con il lato liscio rivolto verso il basso sulla superficie del gel Lasciare il blotter sulla superficie del gel Rimettere a posto la maschera per l applicazione degli...

Page 33: ... 12 00 63 c Procedura Manuale Seguendo la seguenza della camera di colorazione fissare colorare decolorare lavare e al termine asciugare il gel in una stufa da laboratorio con aria forzata 60 70 C 18 l termine del ciclo di colorazione rimuovere il gel dalla camera Il gel è ora pronto per essere esaminato INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI La maggior parte delle proteine monoclonali migra nella zona cat...

Page 34: ...entano delle bande di precipitazione nella stessa posizione in tutte le finestre Questo può essere causato da a IgM monoclonali che aderiscono alla matrice di gel comparendo in tutte e cinque le reazioni anticorpali Dove però l immunoglobulina reagisce con l antisiero specifico sia per le catene pesanti che per le leggere La banda risulta più netta e colorata delle altre facilitandone così l ident...

Page 35: ...gere PERFORMANCE Una serie di campioni sono stati testati e comparati con altri kit disponibili in commercio entrambi i kits hanno mostrato risultati equivalenti Il controllo del siero Kemtrol anomalo Helena Biosciences Cod 7025 può essere diluito in un rapporto di 1 a 100 e utilizzato come controllo positivo per IFE per urina BIBLIOGRAFIA 1 Fauchier P and Catalan F Interpretive Guide to Clinical ...

Page 36: ...oretic Technique Applied to Identification of Proteins in Serum and Cerebrospinal Fluid Clin Chem 1976 22 1262 1268 11 Ritchie R F and Smith R Immunofixation III Application to the Study of Monoclonal Proteins Clin Chem 1976 22 1982 1985 12 Jeppsson J O Laurell C B and Franzen B Agarose Gel Electrophoresis Clin Chem 1979 25 4 629 638 13 Killingsworth L M Cooney S K and Tyllia M M Protein Analysis ...

Page 37: ...asmáticas anormales en la orina tiene un gran valor para la evaluación de las funciones renales Un estudio adecuado de la proteinuria debiera incluir una valoración cuantitativa y cualitativa del tipo y cantidad de proteínas excretadas 1 5 La combinación de la separación electroforética de proteínas de la orina unida a la identificación de tipos específicos de proteínas mediante inmunoprecipitació...

Page 38: ...a Todos los antisueros contienen de acida de sodio como conservante El antisuero viene envasado listo para usar 7 Otros componentes del kit Cada kit contiene una hoja de instrucciones y secantes C D y peines hasta completar 10 geles ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL DE ALMACENAJE 1 Gel de IFE SAS 1 Los geles deben guardarse a una temperatura entre 15 30 C y son estables hasta la fecha de caducidad indica...

Page 39: ...aboratorio 2 3kg no de catàlogo 3100 REP Prep Horno con aire a presión capaz de alcanzar 70 C Solución salina NaCl al 0 85 Los siguientes productos no son necesarios para el IFE de suero estándar pero podrían necesitarse para posteriores investigaciones y para la investigación del IFE de la orina no de catàlogo 220100 Antisuero para proteínas totales de orina humana 2ml no de catàlogo 220200 Antis...

Page 40: ... lu us s pipetear 400µL de REP Prep en el disipador térmico Colocar el gel en el disipador térmico con el lado de agarosa hacia arriba alineando los lados positivo y negativo con los bornes de los electrodos correspondientes teniendo cuidado de evitar las burbujas aéreas debajo del gel i ii ii i S So ol lo o p pa ar ra a 3 3 colocar la guía de alineación en los pasadores y pipetear 400µL de REP Pr...

Page 41: ...ante sea absorbido y luego retirar los peines secantes y la plantilla de la superficie del gel 11 i i S So ol lo o p pa ar ra a S SA AS S 1 1 Retirar ambos bloques de gel utilizando el extractor de bloques de gel Colocar el gel en una solución de lavado durante 5 minutos agitando suavemente i ii i S So ol lo o p pa ar ra a S SA AS S 1 1 P Pl lu us s y y S SA AS S 3 3 Colocar un secante D la cara l...

Page 42: ... indicaciones colorear y secar el gel a SAS 2 Colorador automático P Pa as so o S So ol lu uc ci ió ón n T Ti ie em mp po o m mm m s ss s O Or ri if fi ic ci io o T Te em mp p C C Secar 10 00 55 Lavar Solución de la colada 07 00 4 Colorar Colorante violeta ácido 03 00 5 Decolorar Solución decolorante 02 00 2 Secar 05 00 65 Lavar Solución de la colada 03 00 4 Lavar Solución de la colada 03 00 4 Sec...

Page 43: ...linas cadenas ligeras sueltas LIMITACIONES 1 Exceso de antígeno Se produce un exceso de antígeno cuando no hay anticuerpos ligeramente en exceso o una equivalencia antígeno anticuerpo en el lugar de la precipitación El exceso de antígeno en IFE suele deberse a un exceso de inmunoglobulina en la muestra del paciente El exceso de antígeno está caracterizado por la aparicion de efectos de zona zonas ...

Page 44: ...ta inflamatoria aguda 12 13 La PCR aparece en forma de banda estrecha en el extremo catódico del patrón de la seroproteína Concentraciones elevadas de alfa1 antitripsina y haptoglobina son una clara evidencia de PCR Los pacientes con una banda de PCR tendrán probablemente un elevado nivel al realizar los análisis de PCR A veces puede ser vista una banda estrecha en el punto de aplicación de la mue...

Page 45: ... 1964 10 114 122 7 Alper C A and Johnson A M Immunofixation Electrophoresis A Technique for the Study of Protein Polymorphism Vox Sang 1969 17 445 452 8 Alper C A Genetic Polymorphism of Complement Components as a Probe of Structure and Function Progress in Immunology First International Congress of Immunology 1971 609 624 Academic Press New York 9 Johnson A M Genetic Typing of Alpha 1 Antitrypsin...

Page 46: ......

Page 47: ......

Page 48: ...a Biosciences Europe Queensway South Team Valley Trading Estate Gateshead Tyne and Wear NE11 0SD tel 44 0 191 482 8440 fax 44 0 191 482 8442 email info helena biosciences com helena www helena biosciences com BioSciences Europe ...

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