B60231–AE
62 of 128
•
Μεταγγίστε με ακρίβεια 20 µL Stem-Trol Control Cells στο σωληνάριο.
•
Περιδινήστε τα σωληνάρια για 5 δευτερόλεπτα.
5. Επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου (18–25 °C) για 20 λεπτά, προστατεύοντας από το φως.
6. Προσθέστε 2 mL του παρασκευασμένου 1X NH
4
Cl Lysing Solution μέσα στο σωληνάριο και περιδινήστε
αμέσως για 5 δευτερόλεπτα.
Για λεπτομέρειες σχετικά με την παρασκευή του διαλύματος λύσης, ανατρέξτε στο ένθετο συσκευασίας του
Stem-Kit Reagents.
7. Επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά, προστατεύοντας από το φως.
8. Φυλάξτε τα σωληνάρια σε φορέα τοποθετημένο σε πάγο (2–8 °C), που προστατεύεται από το φως.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ:
Υπάρχει κίνδυνος εσφαλμένων αποτελεσμάτων σε περίπτωση αναρρόφησης φυσαλίδων
αέρα. Η υπερβολική ανάμιξη των Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres μπορεί να
σχηματίσει φυσαλίδες αέρα. Μην αναμιγνύετε υπερβολικά τα Stem-Count ή Flow-Count
Fluorospheres και μην μεταφέρετε φυσαλίδες αέρα μέσα στα σωληνάρια δείγματος
με την πιπέτα.
9. Αναμίξτε απαλά τα Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres αναστρέφοντας το φιαλίδιο 3 έως 5 φορές πριν
από τη χρήση. Αποφύγετε την υπερβολική ανάμιξη ώστε να περιοριστεί ο σχηματισμός φυσαλίδων αέρα.
10.Πριν από τη λήψη, μεταγγίστε με πιπέτα 100 µL Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres στο σωληνάριο.
11. Περιδινήστε για 5 δευτερόλεπτα αμέσως μετά από κάθε προσθήκη.
Φυλάξτε σε θερμοκρασία 2–8 °C.
Επαναλάβετε την περιδίνηση αμέσως πριν από τη λήψη της κυτταρομετρίας ροής.
ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ:
Υπάρχει κίνδυνος εσφαλμένων αποτελεσμάτων σε περίπτωση ανάλυσης ενός δείγματος
πάνω από 1 ώρα μετά την προσθήκη των Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres. Τα
παρασκευασμένα δείγματα πρέπει να αναλύονται εντός 1 ώρας από την προσθήκη των
Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres.
Σύνοψη παρασκευής (Ετικέτα σωληναρίου: TROL45/34/7-AAD)
Αντιδραστήρια και δείγματα
Όγκος
CD45-FITC / CD34-PE
20 µL
Χρωστική βιωσιμότητας 7-AAD
20 µL
Ολικό αίμα
100 µL
Stem-Trol Control Cells
20 µL
Περιδινήστε – Επωάστε για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Προστατεύετε από το
φως.
1X NH
4
Cl Lysing Solution
2 mL
Περιδινήστε – Επωάστε για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Προστατεύετε από το
φως.
Stem-Count Fluorospheres
100 µL
ΜΕΘΟΔΟΣ ΜΗ ΑΥΤΟΜΑΤΗΣ ΟΡΙΟΘΕΤΗΣΗΣ ΚΑΙ ΑΝΑΛΥΣΗΣ
Ρύθμιση πρωτοκόλλων
Το κυτταρόμετρο ροής πρέπει να διαθέτει τη δυνατότητα ανίχνευσης Forward Scatter (Πρόσθια σκέδαση), Side
Scatter (Πλάγια σκέδαση) και τέσσερα κανάλια φθορισμού. Για το κανάλι FL3 (για την παρακολούθηση των
Stem-Count ή Flow-Count Fluorospheres), χρησιμοποιείτε ένα ζωνοπερατό φίλτρο 620 nm. Για το κανάλι FL4 (για
την παρακολούθηση της χρωστικής βιωσιμότητας 7-AAD), χρησιμοποιείτε ένα φίλτρο μακρών κυμάτων 675 nm.
