B60231–AE
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8. Histogramm 8 – „A“ zu Histogramm 8 zuweisen, um alle CD45
+
-Ereignisse anzuzeigen.
Einstellung Durchflusszytometer
1. Das Durchflusszytometer muss richtig justiert und für eine leichte Streuung und Fluoreszenzintensität
entsprechend den Angaben des Herstellers und den Laborrichtlinien standardisiert sein.
Überprüfen,
ob die Farbkompensation auf Standardbetrieb eingestellt ist.
Weitere Anweisungen finden Sie im
Instrumentenhandbuch.
2. Die Probenröhrchen 5 Sekunden lang drehen.
3. Die Datenerfassung mit dem Durchflusszytometer durchführen.
Mindestens 75 000 CD45
+
-Ereignisse
müssen analysiert werden.
4. Diskriminator und Regionen durch Analyse des Probenröhrchens TROL 45/34/7-AAD justieren.
Analysebeispiel
Die im APPENDIX (Anhang) aufgeführten Histogramme werden in aufsteigender Reihenfolge gemäß den Zahlen
im Protokoll angezeigt.
Berechnung der CD34
+
Stem-Trol Control Cells
Dabei werden Durchflusszytometer-Ergebnisse verwendet, die automatisch mit der Assay-Konzentration der
Stem-Count oder Flow-Count Fluorospheres justiert wurden, die mit System II-Software (Version 3.0) und einem
COULTER EPICS XL/XLMCL-Durchflusszytometer erzielt wurden.
Um
automatisch
berechnete
Ermittlungen
der
Absolutzahlen
an
COULTER
EPICS
XL/XL-MCL-Durchflusszytometern zu erhalten, muss vor der Probenentnahme die richtige Assay-Konzentration
für Stem-Count oder Flow-Count Fluorospheres eingetragen werden.
„CAL“ (Berechnung) als Name der Region G für Singuletten der Stem-Count oder Flow-Count Fluorospheres
und den Wert, beispielsweise 1000, in das Feld CAL FACTOR (Berechnungsfaktor) im Dialogfeld STATISTICS
(Statistik) im Menü SET-UP SCREEN PROTOCOL (Protokoll Einrichtungsbildschirm) eingeben.
Erfassung von „CAL Factor“ (Berechnungsfaktor) für Stem-Count oder Flow-Count Fluorospheres:
1. Auf dem Bildschirm „Acquisition Run“ (Entnahme ausführen) die Option „Setup Screen >> Protocol“ (Protokoll
Einrichtungsbildschirm) auswählen.
2. „Statistics“ (Statistik) auswählen >> CAL FACTOR (Berechnungsfaktor).
3. Die Faktorzahl für CAL (Berechnung) (Assay-Konzentration) vom Fläschchen mit Stem-Count oder
Flow-Count Fluorospheres eingeben.
4. ENTER (EINGABE) drücken.
5. OKAY auswählen.
6. An der Eingabeaufforderung zur Bestätigung „Y“ eingeben.
Wenn mindestens 1000 Fluorospheres als Singuletten entnommen wurden, wird die Absolutzahl für die CD34
+
Stem-Trol Control Cells automatisch angepasst und kann direkt aus den Druckergebnissen für die Statistik der
Region D übernommen werden.
Tabelle (nachstehend):
Beispiel für Statistiken, die mit dem Probenröhrchen TROL 45/34/7-AAD mit System II-Software anhand der
Funktion CAL FACTOR (Berechnungsfaktor) erzielt wurden. Dabei gilt:
•
1024 ist die Assay-Konzentration von Stem-Count Fluorospheres.
•
5248 ist die Gesamtzahl gesammelter Fluorospheres in der Region CAL (Berechnung) in der gesamten
Erfassungszeit.
In diesem Beispiel werden alle Zahlen angepasst nach: 1024/5248.
Statistik: Nicht
normalisierte
Histogramme
Sperrliste: ID für
deaktivierte Region
Justierte Zahlen
(Zellen/µL)
1
A
LEUKS
9 798
2
B
CD34 POS
279
3
C
CD45 DIM
264
