NucleoBond
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Xtra Midi/Maxi -
French
MACHEREY-NAGEL – 01/2008/ Rev. 04
53
7.8
Low-copy plasmid purification (Midi, Maxi) –
French
Le volume de tampon de lysis contenu dans le kit est calculé pour la purification
d´ADN plasmidique high-copy. En conséquence, il faut commander des tampons
supplémentaires pour la purification continue d´ADN plasmidique low-copy (voir
section 8.2 sur l´information de commande).
Midi
Maxi
1
Préparation d’une pré-culture
Inoculez 3-5 ml d’un milieu de pré-culture LB avec une colonie piquée sur une
plaque d’Agar fraîchement striée. Assurez-vous que la plaque et le milieu de
culture contiennent le bon antibiotique afin d’être sûr d’obtenir le plasmide (pour
d’autres informations voir sections 4.3). Agitez à 37°C à ~300 rpm pendant ~8 h.
2
Préparation d’une culture overnight grand volume
Inoculez une culture overnight en diluant la pré-culture au 1/1000ième dans un
volume donné de milieu LB contenant l’antibiotique sélectif approprié. Si la culture
présente une faible croissance ou si le plasmide est connu pour être faiblement
représenté, consultez la section 4.5 du protocole pour l’utilisation de plus grands
volumes de culture.
Faites pousser la culture toute la nuit à 37°C à ~300 rpm pendant 12–16 h.
Remarque : Afin d’utiliser au maximum la capacité de fixation des colonnes
NucleoBond
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Xtra il est nécessaire de charger une quantité suffisante d’ADN
plasmidique. Pour le protocole low-copy standard, le volume de culture recommandé est
doublé par rapport au protocole high-copy. Cependant, étant donné que le contenu
plasmidique des cellules peut être 10-100 fois inférieur, le volume de culture peut être
insuffisant. Si vous avez besoin de grandes quantités de plasmides low-copy ,
augmentez à nouveau le volume de culture d’un facteur 3-5
(voir la section 4.5 pour plus
d’informations) et décidez à l’étape 3 de la quantité de cellules à utiliser pour la
préparation.
Le volume mentionné ci-après de la culture overnight est calculé pour la
valeur de l’OD
600
de 4 (voir chapitre 4.5 comme référence).
200 ml
600 ml
