NucleoBond
®
Xtra Midi/Maxi -
French
MACHEREY-NAGEL – 01/2008/ Rev. 04
50
Midi
Maxi
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Clarification et chargement
Assurez-vous d’avoir une suspension homogène du précipité en
inversant le
tube 3 fois
avant d’appliquer directement le lysat sur le filtre NucleoBond
®
Xtra
préalablement équilibré, afin d’éviter que le filtre ne se bouche.
Le lysat est simultanément clarifié et chargé sur la colonne. Rechargez le filtre si
le volume de lyse est plus important que la capacité du filtre. Laissez la colonne
se vider par gravité.
Alternative :
Le précipité peut être éliminé par centrifugation
5,000 x
g
pendant
au moins 10 mn, par ex. si plus du double de la masse cellulaire recommandée a
été utilisé. S’ il reste des matières en suspension, transférez dans un nouveau
tube et répétez l’étape de centrifugation, de préférence à une vitesse plus élevée,
ou chargez le lysat sur le filtre NucleoBond
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Xtra préalablement équilibré.
Cette étape de clarification est extrêmement importante. En effet, les résidus du
précipité peuvent boucher la colonne NucleoBond
®
Xtra. Pour charger la colonne
vous pouvez appliquer le lysat clarifié sur le filtre préalablement équilibré ou
enlever préalablement le filtre s’il est inutilisé. Laissez la colonne se vider par
gravité.
Remarque : Vous pouvez garder tous les filtrats pour les analyser (voir section 8.1)
9
Lavage du filtre et de la colonne
(Buffer EQU)
Lavez le filtre NucleoBond
®
Xtra et la colonne
NucleoBond
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Xtra avec le tampon
Equilibration Buffer
EQU.
Déposez le tampon sur la collerette du filtre et assurez-
vous que le lysat est bien lavé. Omettre cette étape ou
déposer simplement le tampon dans le filtre réduit le
rendement d’ADN plasmidique.
5 ml
15 ml
10 Eliminer le filtre
Retirez le filtre NucleoBond
®
Xtra ou éliminez le en retournant la
colonne.
