NucleoBond
®
Xtra Midi/Maxi -
French
MACHEREY-NAGEL – 01/2008/ Rev. 04
51
Midi
Maxi
11 Lavage de la colonne
(Buffer WASH)
Lavez la colonne NucleoBond
®
Xtra avec le tampon de lavage
Wash Buffer WASH
. Il est important d’éliminer le filtre avant
d’appliquer le tampon de lavage. En effet, ceci pourrait avoir un
mauvais impact sur la pureté de l’ADN.
8 ml
25 ml
12 Elution
(Buffer ELU)
Eluez l’ADN plasmidique avec le tampon d’élution
Elution Buffer ELU
. Collectez
le tampon d’élution avec l’ADN plasmidique dans un tube de centrifugation de
15 ml ou 50 ml.
Remarque : Chauffer tampon d’élution ELU à 50°C avant l’élution peut améliorer le
rendement d’ADN plasmidique de gros taille comme des BACs.
Passez à
l’étape 13
pour le protocole de centrifugation après la précipitation à l’
isopropanol ou continuez avec
la section 7.9
pour la concentration de l’ADN
plasmidique et son désalage au moyen du système NucleoBond
®
Finalizer
(NucleoBond
®
Xtra Midi Plus) ou NucleoBond
®
Finalizer Large (NucleoBond
®
Xtra
Maxi Plus).
Option : Déterminez le rendement d’ADN plasmidique par spectrophotométrie UV afin
d’ajuster la concentration de l’ADN à l’étape 15 et calculez le taux de récupération après
l’étape de précipitation.
5 ml
15 ml
13 Précipitation
Ajoutez
l’isopropanol à température ambiante
pour précipiter l’ADN
plasmidique élué. Vortexez et laissez le mélange reposer pendant
2 minutes
.
Centrifugez à
5,000 x
g
pendant
15 min
à
température ambiante,
de
préférence à
15,000 x
g
pendant
30 min
à
4°C
. Eliminez précautionneusement le
surnageant.
3.5 ml
10.5 ml
