113
c флуорохромом, которым обработан препарат, в ход лучей флуоресцентного осветителя необходимо установить один из
пяти светоделительных блоков, приведенных в таблице 1 подраздела «Система освещения падающим светом».
Например, для достаточно распространенной обработки препаратов по FITC требуется спектральный блок №3 («B»), для
Auramine — блок №4 («V»), для окрасок, свечение которых приходится на красную область спектра, — блок №2 («G»). Для
окрасок DAPI и Hoechst применяется блок №6 («U»), при работе с этим блоком светофильтр должен быть выведен из хода
лучей рукояткой (рис. 2, 1).
Далее необходимо:
•
установить объект на предметный столик (рис. 2, 10) микроскопа;
•
включить в ход лучей объектив с увеличением 10х (рекомендуется начинать процесс фокусировки с объективов
малого или среднего увеличения, имеющих достаточно большие поля зрения и рабочие расстояния);
•
сфокусировать микроскоп вращением рукояток (рис. 2, 12 и 13) на резкое изображение объекта;
•
прикрыть полевую и апертурную диафрагму рукоятками (рис. 1, 5 и 6);
•
наблюдая изображение объекта, убедиться, что изображение ирисовой полевой диафрагмы расположено
концентрично полю окуляра (при смещении диафрагмы произвести ее центрировку);
•
в случае смещения изображения полевой диафрагмы привести изображение в центр поля зрения рукоятками (рис. 2, 2);
•
открыть полевую диафрагму рукояткой (рис. 1, 5) по диаметру окулярного поля, чтобы края ирисовой диафрагмы
несколько выходили за пределы поля окуляра;
•
открыть апертурную диафрагму рукояткой (рис. 1, 6), наблюдая поле зрения окуляра убедиться, что освещение
достаточно равномерное, при необходимости поправить фокусировку коллектора рукояткой (рис. 1, 7);
•
фокусировку на объект при наблюдении с бинокулярными тубусами необходимо выполнить так же, как указано в
подразделе «Фокусировка микроскопа при бинокулярном наблюдении» при работе в проходящем свете;
•
приступить к исследованию объектов, с небольшими перерывами в работе. Для предотвращения выцветания
препарата необходимо перекрывать световой поток, идущий от лампы, рукояткой (рис. 2, 1).
Увеличение микроскопа и диаметр поля на объекте
Общее увеличение Г микроскопа при визуальном наблюдении с бинокулярной насадкой определяется по формуле:
Γ
=
β
об ∙
β
н ∙
Γ
ок
где βоб — линейное увеличение объектива микроскопа;
βн — линейное увеличение насадки, равное 1,0;
Гок — видимое увеличение окуляра.
Диаметр поля зрения, наблюдаемого на объекте, Доб мм, определяется по формуле:
Д
oб =
Д
ок
β
об ∙
β
н
где Док — диаметр окулярного поля зрения, ограниченного полевой диафрагмой окуляра, мм.
