123
Daldırma objektif merceğini kullanmak için:
•
lamel yuvasını bir düğme (şek. 2, 13) ile alçaltın;
•
nesneye daldırma yağı uygulayın;
•
lamel yuvasını kaba odaklama düğmelerini (şek. 2, 13) kullanarak nesnedeki daldırma yağı damlası ile temas edene kadar
objektif merceğini dikkatlice kaldırın;
•
göz merceklerinin içinden gözlem yaparak ve ince odaklama düğmesini (şek. 1, 19 veya şek. 2, 12) kullanarak incelenen
nesnenin keskin bir görüntüsünü elde edin.
Odaklama sürecinde göz merceği alanında daldırma yağı katmanında bulunabilecek hava kabarcıklarının görüntüsü belirirse,
kaba odaklama düğmelerini (şek. 2, 13) kullanın, lamel yuvasını indirin ve odaklamayı yineleyin.
Nesnelerin incelenmesi için objektif merceğinin iris diyaframının 100x/1,3 kadar açık olduğundan emin olunması
gerekmektedir.
Görüntü kontrastının artırılması için öncelikle kondansatör açıklık diyaframını bir düğme (şek. 3, 1) ile ayarlayın ve ardından
objektif merceği iris diyaframı ile kontrastta daha ince bir ayar gerçekleştirin.
İşlemin tamamlanmasının ardından emici kağıt ile daldırma yağını ön objektif merceğinden giderin ve kontamine olmuş
alanları bir çubuğa sarılmış ve eter veya alkol karışımına hafifçe batırılmış bir pamuk ile silin.
Temizleme işlemi sırasında ön objektif merceğine bastırmayın.
Daldırma objektif merceğinin yanlış kullanılması nedeniyle görüntü kontrastının düşmesi veya keskinliğin kaybolması
durumunda aşağıdakiler önerilir:
•
objektif merceğini gevşetin ve ön merceği yukarıda gösterilen şekilde temizleyin;
•
bir masa lambası ve büyüteçten gelen eğik ışığı kullanarak ön mercek yüzeyinde daldırma yağı kalıntısı, çatlak veya girinti
bulunmadığından emin olun;
•
mikroskop aydınlatma kurulumunu kontrol edin (kondansatör açıklığı diyaframı mercek gözü boyutu kadar veya göz
boyutunun 2/3’ü kadar açılmış olmalıdır).
Nesnelerin floresan ışıkta gözlemlenmesi
Cıva dolgulu lambanın etkinleştirilmesi ve aydınlatma kurulumu
Cıva dolgulu lamba güç kaynağı ünitesini şebekeye bağlayın. Güç anahtarını "I" konumuna getirerek cıva dolgulu lambayı
etkinleştirin.
Cıva dolgulu lambanın çalışma parametrelerine ulaşması en az 10 dakika sürer. Normal lamba çalışma modu, ampermetre ve
voltmetre oklarının ölçeğin ortasında bulunması anlamına gelir.
UYARI! CIVA DOLGULU LAMBAYI YAKTIKTAN SONRA EN AZ 15 DAKİKA GEÇMEDEN DEVRE DIŞINA ALMAYIN! LAMBAYI
YALNIZCA DEVRE DIŞINA ALINDIKTAN 15—20 DAKİKA SONRA YENİDEN ETKİNLEŞTİREBİLİRSİNİZ!
Lamel yuvası ile aynı büyüklükte beyaz bir kağıt parçasına "+" işaretini çizin ve kağıdı lamel yuvasına yerleştirin. 4x büyütme
objektifi merceğini ışınların yoluna yerleştirin. Düğmeyi (şek. 2, 1) muhafaza içine doğru kaydırın ve filtreyi ışınların yoluna
yerleştirin. Düğmeleri (şek. 1, 5 ve 6) kullanarak alan ve açıklık diyaframının açın. Spektral ışın bölme ünitelerini No.3 ("B")
konumuna getirmek için halkayı (şek. 1, 27) takın.
Göz merceği içinden gözlem yaparak ve lamel yuvasını kaba odaklama düğmesi (şek. 2, 13) ile hareket ettirerek kağıt sayfa
yüzeyinin görüntüsünü alın. Kağıt sayfayı lamel yuvası yüzeyinde hareket ettirerek "+" görüntüsünü göz merceği alanı merkezine
getirin. Objektif merceği içermeyen döner parça yuvasını ışın yoluna getirin.
Cıva dolgulu lamba deşarj arkı ve elektrotlarından en keskin görüntüyü almak için kağıt sayfa yüzeyini yandan gözlemleyerek
(göz merceği içinden değil) kolektörü düğme (şek. 1, 7) ile hareket ettirin. Cıva dolgulu lamba konumunu düzenleyen 10 ve 11
düğmelerini (şek. 1) kullanarak deşarj arkı görüntüsünü kağıt sayfa yüzeyindeki "+" işaretinin üzerine getirin (göz merceği alan
merkezinde). 4x ve 10x büyütme objektifi merceğini ışınların yoluna yerleştirin. Göz merceği içinden gözlem yaparak ve kolektörü
düğme (şek. 1, 7) ile hareket ettirerek alanda en eşit aydınlatmayı elde edin.
Nesnelerin gözlemlenmesi
Floresans ışıkta inceleme için nesneler belirli absorpsiyon (tetikleme) ve parlama özelliklerine sahip özel boyalar (florokromlar)
ile işleme tabi tutulur. Slayta işlem uygulamak için kullanılan florokroma uygun şekilde "Çarpan ışık aydınlatma sistemi"
bölümünde tablo 1’de verilen floresan aydınlatıcının ışın yollarına beş demet bölücü üniteden birinin yerleştirilmesi
gerekmektedir.
Örneğin slaytlarda FITC ile işlem yapılırken spektral ünite No.3 ("B"), Auramin için ünite No.4 ("V") ve kırmızı spektral
aralığında parlayan boyalar için ünite No.2 ("G") gereklidir. DAPI ve Hoechst boyalarda, ünite No.6 ("U") kullanılır; bu ünite ile
çalışılacağında filtre bir düğme (şek. 2, 1) ile ışın yolundan kaldırılmalıdır.
Ayrıca aşağıdakileri yapın:
•
nesneyi mikroskopun lamel yuvasına (şek. 2, 10) yerleştirin;
•
10x büyütme oranlı objektif merceğini ışınların yolunda etkinleştirin (odaklama işleminin düşük veya orta düzeyde büyütmeli
objektif merceklerinden ve yeterli genişlikte alanlar ve çalışma mesafeleri sağlanarak başlatılması önerilir);
•
nesnenin keskin görüntüsünü elde etmek için düğmeleri (şek. 2, 12 ve 13) döndürerek mikroskopu odaklayın;
•
alan ve açıklık diyaframını düğmeler (şek. 1, 5 ve 6) ile kapatın;
•
nesne görüntüsünü gözlemleyerek iris alan diyaframının göz merceği alanına eş merkezli olarak konumlandırıldığından emin
olun (diyaframda yer değişikliği varsa, hizalama yapın);
•
alan diyaframı görüntüsünün yeri değiştirilmişse, görüntüyü düğmeleri (şek. 2, 2) kullanarak alanın merkezine getirin;
•
alan diyaframını göz merceği alan çapı boyunca bir düğme (şek. 1, 5) ile açın ve iris diyaframının kenarlarının göz merceği
alanını bir miktar aşmasını sağlayın;
