90
Następnie można przystąpić do pracy z obiektywami o większym powiększeniu, w tym z obiektywem do obserwacji z użyciem
olejku immersyjnego.
Używanie obiektywów immersyjnych
Obiektywów immersyjnych należy używać w pomieszczeniach o temperaturze od +15 do +25 °C. Stosuj olejek immersyjny o
współczynniku załamania światła nD = 1,515.
OSTRZEŻENIE! NIE NALEŻY STOSOWAĆ ZAMIENNIKÓW ZAMIAST OLEJKU IMMERSYJNEGO, PONIEWAŻ MOŻE TO
ZNACZNIE POGORSZYĆ JAKOŚĆ OBRAZU.
Przed rozpoczęciem pracy z obiektywami immersyjnymi należy ustawić mikroskop zgodnie z opisem w podrozdziałach
"Włączanie lampy halogenowej i konfigurowanie układu oświetlenia" oraz "Wybór obiektywów" i wyraźnie określić obszar
preparatu do dokładniejszego zbadania.
Aby używać obiektywu immersyjnego:
•
opuść stolik przy użyciu pokrętła (rys. 2, 13);
•
nanieś olejek immersyjny na preparat;
•
ostrożnie podnieś stolik przy użyciu pokręteł zgrubnej regulacji ostrości (rys. 2, 13), aż soczewka obiektywowa zetknie
się z kroplą olejku na preparacie;
•
patrząc przez okulary i używając pokrętła precyzyjnej regulacji ostrości (rys. 1, 19 lub rys. 2, 12), ustaw ostry obraz
badanego preparatu.
Jeśli w trakcie ustawiania ostrości w polu widzenia okularu pojawią się obrazy pęcherzyków powietrza znajdujących się w
warstwie olejku immersyjnego, użyj pokręteł zgrubnej regulacji ostrości (rys. 2, 13), opuść stolik i powtórz procedurę regulacji
ostrości.
Aby badać preparaty, należy sprawdzić, czy przysłona irysowa obiektywu 100х/1,3 jest otwarta.
W celu zwiększenia kontrastu obrazu należy w pierwszej kolejności ustawić przysłonę aperturową kondensora przy użyciu
pokrętła (rys. 3, 1), a następnie dokonać precyzyjnej regulacji kontrastu przy użyciu przysłony irysowej obiektywu.
Po zakończeniu obserwacji należy usunąć bibułą olejek immersyjny z przedniej soczewki obiektywowej i wytrzeć
zanieczyszczone powierzchnie bawełną nawiniętą na patyczek, nasączoną niewielką ilością mieszaniny eteru lub alkoholu.
Nie wolno naciskać przedniej soczewki obiektywowej podczas czyszczenia.
Jeśli w wyniku niewłaściwego obchodzenia się z obiektywem immersyjnym zmniejszył się kontrast obrazu lub utracił on ostrość,
zaleca się wykonanie następujących czynności:
•
odkręć obiektyw, wyczyść przednią soczewkę w sposób pokazany powyżej;
•
używając światła padającego ukośnie z lampy stołowej i lupy, sprawdź, czy na powierzchni przedniej soczewki nie ma
zanieczyszczeń, śladów olejku immersyjnego, rys lub wgnieceń;
•
sprawdzić ustawienie oświetlenia mikroskopu (przysłona aperturowa kondensora powinna być otwarta zgodnie z rozmiarem
soczewki obiektywowej lub do 2/3 średnicy soczewki).
Obserwacja preparatów w świetle fluorescencyjnym
Włączanie lampy rtęciowej i konfigurowanie układu oświetlenia
Podłącz zasilacz lampy rtęciowej do sieci elektrycznej. Uruchom lampę rtęciową, ustawiając przełącznik zasilania w położeniu "I".
Lampa rtęciowa potrzebuje co najmniej 10 minut, aby osiągnąć parametry robocze. Normalny tryb pracy lampy oznacza, że strzałki
amperomierza i woltomierza są ustawione na środku skali.
OSTRZEŻENIE! NIE WOLNO WYŁĄCZAĆ LAMPY RTĘCIOWEJ WCZEŚNIEJ NIŻ PO 15 MINUTACH OD JEJ WŁĄCZENIA!
LAMPĘ MOŻNA WŁĄCZYĆ PONOWNIE DOPIERO PO 15—20 MINUTACH OD JEJ WYŁĄCZENIA!
Na kartce białego papieru o wymiarach stolika narysuj znak "+" i połóż kartkę na stoliku. Wybierz obiektyw o powiększeniu 4x i
ustaw go na drodze wiązki światła. Wsuń pokrętło (rys. 2, 1) w obudowę i ustaw filtr na drodze wiązki światła. Przy użyciu pokręteł
(rys. 1, 5 i 6) otwórz przysłony polową i aperturową. Przy użyciu pierścienia (rys. 1, 27) przełącz moduły rozdzielacza wiązki
spektralnej do pozycji nr 3 ("B").
Patrząc przez okular i przesuwając stolik pokrętłem zgrubnej regulacji ostrości (rys. 2, 13), uzyskaj obraz powierzchni arkusza
papieru. Przesuwając arkusz papieru po powierzchni stolika, ustaw znak "+" na środku pola widzenia okularu. Wybierz wolne
gniazdo miski rewolwerowej i ustaw je na drodze wiązki światła.
Patrząc z boku (nie przez okular) na powierzchnię arkusza papieru, przesuwaj kolektor pokrętłem (rys. 1, 7), aby uzyskać jak
najostrzejszy obraz łuku wyładowczego lampy rtęciowej i jej elektrod. Pokrętłami 10 i 11 (rys. 1), regulującymi położenie lampy
rtęciowej, ustaw obraz łuku wyładowczego na znaku "+" na powierzchni kartki papieru (na środku pola widzenia okularu). Wybierz
obiektyw o powiększeniu 4x, a następnie 10x i ustaw go na drodze wiązki światła. Patrząc przez okular i przesuwając kolektor
pokrętłem (rys. 1, 7), uzyskaj najbardziej równomierne oświetlenie pola widzenia.
Obserwowanie preparatów
Preparaty do badań w świetle fluorescencyjnym są poddawane działaniu specjalnych barwników (fluorochromów) o
określonych charakterystykach spektralnych absorpcji (wzbudzenia) i luminescencji. W zależności od rodzaju fluorochromów
używanych do barwienia preparatu, konieczne jest ustawienie jednego z pięciu modułów rozdzielacza wiązki na drodze wiązki
promieni oświetlacza fluorescencyjnego, podanych w tabeli 1 w podrozdziale "Układ oświetlania światłem padającym".
Przykładowo w przypadku dość powszechnego barwienia preparatów z użyciem FITC jest wymagany moduł spektralny nr 3
("B"), dla auraminy — moduł nr 4 ("V"), dla barwników świecących w zakresie spektralnym światła czerwonego — moduł nr 2
("G"). W przypadku barwników DAPI i Hoechst stosuje się moduł nr 6 ("U"). Podczas pracy z tym modułem należy usunąć filtr z
