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Japanese

準備

試薬

1. 試薬キットの調製を、キット同梱の文書または

完全版のユーザーガイド（オンライン）に従って

行います。

2. 低温で保管されている下記の製品を室温になじま

せます（20～25°C、約10分間）。

•   IEF Chip
•   PAGE Chip
•   Rehydration Solution
•   DTT Solution
•   アンフォライト

3. タンパク質試料の抽出/希釈およびIEF Chipの膨

潤のためのワーキングRehydration solutionを

調製します。

試薬

体積

最終濃度

Rehydration

Solution

189 µL

DTT Solution

(1M)

10 µL

50 mM

アンフォライト*

1～2 µL

0.5～1% v/v

合計

200 µL

* アンフォライトはIEF ChipのpH範囲に合わせ

て選んでください。40％原液のアンフォライトは

1µLを加えてください。100倍濃度のアンフォライ

トは2µLを加えてください。

4. SDS-PAGE前のタンパク質の平衡化用にワーキン

グEquilibration Bufferを調製してください。

試薬

体積

最終濃度

Equilibration

Buffer Premix

760 µL

DTT Solution

(1M)

40 µL

50 mM

合計

800 µL

試料の調製

タンパク質試料を、ステップ3に従って調製したワーキン

グRehydration solutionに溶解させます。液体の試料は

ワーキングRehydration solutionで2倍以上に希釈して、

目的のタンパク質濃度にし、塩濃度を出来るだけ減少さ

せるようにしてください。
塩濃度が高いと等電点電気泳動中に電流が100µAを

超え、タンパク質分離に影響することがあります。高塩

濃度の試料は次の内何れかの方法で脱塩を実施してく

ださい。

TCA/アセトン沈

殿処理からのワーキングRehydration solutionによ

る再懸濁または
スピンカラムを用いたワーキング

Rehydration solutionへの交換または
Auto2D®装置を用いた脱塩プロトコル

（詳細はユーザーガイド完全版をご覧ください）

注：

タンパク質の再懸濁中、タンパク質を37 °C以上に加

熱しないでください。
試料中のタンパク質を定量してください。Auto2Dには0.1

～100µgのタンパク質を導入できます。タンパク質の適量

は検出方法と試料の複雑さによって異なります。次のタン

パク質量をまず試してから、個々の試料に応じた最適な

アプライ量を決定してください。
•   CBB染色液による検出：50 µg
•   蛍光染色液による検出：10 µg
•   銀染色：5 µg
•   蛍光pre-labeling：3 µg
Solution Chipにアプライするタンパク質の量に基づい

て、タンパク質の分離にS、M、Lの何れのレシピを使うか

を決定してください。
デバイスにアプライ出来る試料の体積は13～15µLです。

試料は必要に応じてワーキングRehydration solutionで

希釈してください。

Auto2D

装置の電源を入れる

各国の電源コンセントに適切な電源コード（同梱）を選択

します。コードの片端をAuto2D®装置のインレットにしっか

りと差し込み、プラグをコンセントに差し込みます。

電源スイッチはAuto2D®装置背面のACプラグポートの隣

にあります。スイッチを上に押し上げて電源を入れます。
アプリケーションは自動的に起動します。画面から

Auto2D® Plusモードを選択します。

レシピの読み込み

SETTING → RECIPE を選択します。Recipe Information

（レシピ情報）画面をタッチします。Recipe Selectionダ

イアログボックスが表示されます。

”RECIPE NAME” → LOAD → OK → EXIT を選択します。

注：

使いたいレシピ名が画面右上に表示されていること

を確認します。

チップの準備

PAGE Chip

Eチップ

陰極側

陽極側

1. チップの陽極側にある白いテープをはがします。
2. チップの陰極側にあるプラスチックのカバーを慎

重に取り外します。

3. 陽極と陰極のバッファー溝を蒸留水で優しくすすぎ

ます。紙ワイパーを用いてチップ外側の液体を拭き

去ります。この際チップの陰極側に露出している細

長いゲルに傷をつけないように気をつけます。

チップをトレイにセットする

Auto2D®装置のタッチスクリーンで OPEN → OK
を選択します。トレイが開いたら、PAGE Chip

（水色のライ

ン）

を陽極側を手前にして置きます。Solution Chip Plus

（濃青色のライン）

をPAGE Chipの上に、角の取れた側を

手前にして置きます。

Содержание Millipore Auto2D Plus

Страница 1: ...gmaAldrich com English 2 Français French 7 Español Spanish 13 Nederlands Dutch 19 Deutsch German 25 Italiano Italian 31 日本語 Japanese 37 中文 Chinese 42 한국어 Korean 47 Product Ordering 52 Quick Start Guide Auto2D Plus Mode BM 100 ...

Страница 2: ...ution 189 µL DTT Solution 1M 10 µL 50 mM Ampholyte 1 2 µL 0 5 1 v v Total 200 µL Select ampholyte according to the range of IEF Chip to use For ampholytes at 40 stock concentration add 1 µL For ampholytes at 100X add 2 µL 4 Prepare Working Equilibration Buffer for equilibration of focused proteins before SDS PAGE Reagents Volume Final Concentration Equilibration buffer premix 760 µL DTT Solution 1...

Страница 3: ...ners in the front Anode Side Cathode Side IEF Chip Remove the IEF Chip protective film Insert the IEF Chip in the slot indicated by the white dot on the Electrode Chip Plus Before the Starting Eletrophoresis step verify the following Electrode Chip Plus is not wet except for anode and cathode chamber The clear cover on the cathode side of the PAGE Chip is removed Solution has been added where requ...

Страница 4: ...l Assistance Visit the tech service page at SigmaAldrich com techservice Standard Warranty The applicable warranty for the products listed in this publication may be found at SigmaAldrich com terms Français French Utilisation prévue L appareil d électrophorèse Auto2D permet d automatiser intégralement la procédure d électrophorèse 2D en séparant d abord les protéines selon leur point isoélectrique...

Страница 5: ...horèse 2D La quantité optimale de protéines dépend de la méthode de détection et de la complexité de l échantillon Les quantités suivantes de protéines doivent être utilisées comme point de départ Il est possible que les utilisateurs doivent optimiser la quantité de protéines chargées pour leur échantillon particulier Coloration au bleu brillant de Coomassie 50 µg Marquage fluorescent 10 µg Colora...

Страница 6: ...arquée d un point blanc sur la Puce Électrodes Plus Avant l étape de démarrage de l électrophorèse vérifier ce qui suit La Puce Électrodes Plus n est pas humide sauf au niveau des compartiments d anode et de cathode La cache transparente côté cathode de la Puce PAGE est retirée Les solutions ont été ajoutées aux emplacements prévus Démarrage de l électrophorèse Sélectionner CLOSE Fermer OK START D...

Страница 7: ...com techservice Garantie La garantie applicable aux produits figurant dans cette publication est disponible sur SigmaAldrich com terms Español Spanish Indicaciones de uso La unidad de electroforesis Auto2D automatiza por completo el proceso de electroforesis bidimensional separando las proteínas primero por el punto isoeléctrico y luego por el peso molecular La separación completa de la proteína s...

Страница 8: ... óptima de proteína dependerá del método de detección y de la complejidad de la muestra Como punto de partida deberán utilizarse las siguientes cantidades de proteínas los usuarios quizá tengan que optimizar la cantidad cargada en función de su muestra concreta Tinción con azul brillante Coomassie 50 µg Tinción fluorescente 10 µg Tinción con plata 5 µg Premarcaje fluorescente 3 µg Utilice la canti...

Страница 9: ...IEF Introduzca el Chip de IEF en la hendidura indicada por el punto blanco en el Chip de electrodo Plus Antes de empezar la etapa de electroforesis verifique lo siguiente El Chip de electrodo Plus no está húmedo excepto en las cámaras del ánodo y del cátodo Está retirada la tapa transparente del lado del cátodo del Chip de PAGE Se ha añadido la disolución donde es necesaria Inicio de la electrofor...

Страница 10: ...e dimensie SDS PAGE Detectie 3 minuten 10 minuten 17 minuten 3 minuten Gel rehydratatie 33 minuten Apagado Elija MENU EXIT APPLICATION OK SYSTEM OS SHUT DOWN OK MENÚ SALIR DE LA APLICACIÓN OK SISTEMA APAGAR SO OK Apague el interruptor en la parte trasera del dispositivo NOTA Si observa condensación en el interior del dispositivo deje abierta la bandeja durante un rato antes de apagarlo para permit...

Страница 11: ...timale hoeveelheid eiwit is afhankelijk van de detectiemethode en monstercomplexiteit De volgende eiwit hoeveelheden dienen als startpunt te worden gebruikt de gebruiker kan de laadhoeveelheid optimaliseren voor hun eigen monster Coomassie Brilliant Blue staining 50 µg Fluorescent staining 10 µg Silver staining 5 µg Fluorescent pre labeling 3 µg Gebruik de hoeveelheid eiwit die in de Solution Chip...

Страница 12: ...ies CLOSE sluiten OK START OK De elektroforese gaat beginnen Na Elektroforese Verwijder de gel Kies OK OPEN OK 1 Verwijder de IEF Chip en gooi deze samen met resterende oplossingen in de Solution Chip Plus weg Zie rubriek Afvoeren 2 Verwijder de PAGE Chip en spoel af met gedestilleerd water 3 Open de cassette met spatel 4 Markeer de oriëntatie van de gel door een kleine inkeping te maken in een va...

Страница 13: ...dann nach Molekulargewicht Eine komplette Proteintrennung wird in knapp über einer Stunde erzielt Inhalt Auto2D Elektrophoresegerät Netzkabel Netzkabel für Japan und Nordamerika 3P 2P Konversionsstecker für Japan und Nordamerika Netzkabel für Europa Netzkabel für China Netzkabel für das Vereinigte Königreich Ebenfalls erforderlich nicht im Lieferumfang enthalten Bestellnummern finden Sie auf Seite...

Страница 14: ...100 µg Protein geladen werden Die optimale Proteinmenge hängt von der Detektions methode und der Probenkomplexität ab Die folgenden Proteinmengen sind als Ansatzpunkt zu verwenden Die Anwender müssen die Lademenge ggf für ihre bestimmte Probe optimieren Coomassie Brillantblau Färbung 50 µg Fluoreszenzfärbung 10 µg Silberfärbung 5 µg Fluoreszenz Vormarkierung 3 µg Bestimmen Sie anhand der in den Lö...

Страница 15: ... mit einem weißen Punkt gekennzeichnet ist Bestätigen Sie vor dem Start der Elektrophorese dass der ElektrodenChip Plus außer der Anoden und Kathodenkammer nicht nass ist die durchsichtige Abdeckung auf der Kathodenseite des PAGE Chips entfernt wurde alle erforderlichen Lösungen zugegeben wurden Starten Sie die Elektrophorese Wählen Sie CLOSE OK START OK SCHLIESSEN OK STARTEN OK Die Elektrophorese...

Страница 16: ...kte in diesem Dokument finden Sie online unter SigmaAldrich com terms Italiano Italian Uso previsto Il dispositivo per elettroforesi Auto2D automatizza completamente il processo di elettroforesi 2D separando le proteine prima in base al punto isoelettrico e poi in base al peso molecolare La completa separazione delle proteine richiede poco più di un ora Contenuto Dispositivo per elettroforesi Auto...

Страница 17: ... C Quantificare le proteine Nell elettroforesi 2D è possibile caricare da 0 1 a 100 µg di proteine La quantità ottimale dipende dal metodo di rilevamento e dalla complessità del campione Come punto di partenza si consiglia di usare le seguenti quantità di proteine gli utenti potrebbero dover ottimizzare la quantità da caricare in relazione al loro campione specifico Colorazione con blu di Coomassi...

Страница 18: ...overe la pellicola protettiva del Chip IEF Inserire il Chip IEF nell alloggiamento indicato dal punto bianco posto sul Chip Elettrodo Plus Prima di iniziare la corsa elettroforetica verificare quanto segue il Chip Elettrodo Plus non deve essere bagnato ad eccezione delle camere dell anodo e del catodo la copertura trasparente sul lato catodico del Chip PAGE deve essere stata rimossa le soluzioni r...

Страница 19: ...documento possono essere modificate senza preavviso e non devono quindi essere interpretate come una dichiarazione d impegno da parte del produttore del venditore o di loro affiliate Decliniamo qualsiasi responsabilità per eventuali errori presenti Per contattarci Per l indirizzo della sede più vicina consultare SigmaAldrich com offices Assistenza tecnica Visitare la pagina del Servizio Tecnico Si...

Страница 20: ...tion solutionへの交換または Auto2D 装置を用いた脱塩プロトコル詳細はユーザーガイド完全版をご覧ください注タンパク質の再懸濁中タンパク質を37 C以上に加熱しないでください試料中のタンパク質を定量してください Auto2Dには0 1 100µgのタンパク質を導入できますタンパク質の適量は検出方法と試料の複雑さによって異なります次のタンパク質量をまず試してから個々の試料に応じた最適なアプライ量を決定してください CBB染色液による検出 50 µg 蛍光染色液による検出 10 µg 銀染色 5 µg 蛍光pre labeling 3 µg Solution Chipにアプライするタンパク質の量に基づいてタンパク質の分離にS M Lの何れのレシピを使うかを決定してくださいデバイスにアプライ出来る試料の体積は13 15µLです試料は必要に...

Страница 21: ...PlusとIEF Chipを外し残っている溶液も含め廃棄します廃棄セクションをご覧ください 2 PAGE Chipを取り出し蒸留水で洗浄します 3 スパチュラでPAGE Chipを開けます 4 ゲルの角のひとつに小さい切り込みを入れてゲルの向きに印をつけますこうすることで塩基性側と酸性側高分子量側と低分子量側を見分けやすくなります下図参照高分子量低分子量酸性側塩基性側クリーンアップ使用後 Electrode Chip Plusを蒸留水で直ちに洗浄し自然乾燥します電源オフ MENU EXIT APPLICATION OK SYSTEM OS SHUT DOWN OK を選択します装置背面のスイッチをオフにします注装置内部に結露が見られる場合は電源をオフにする前にトレイをしばらく開放しておき内部を乾燥させてください廃棄試料に触れた消...

Страница 22: ...说明制备和存放试剂盒 2 让以下低温储存的产品平衡至室温 20 25 C约 10分钟 IEF芯片 PAGE芯片复水溶液 DTT溶液两性电解质 3 制备用于IEF芯片复水以及蛋白质样品提取稀释的工作复水溶液试剂体积最终浓度复水溶液 189 µL DTT溶液 1M 10 µL 50 mM 两性电解质 1 2 µL 0 5 1 v v 总计 200 µL 根据要使用的IEF芯片的范围选择两性电解质对于原液浓度为40 的两性电解质添加1 µL 对于100X的两性电解质添加2 µL 4 在SDS PAGE之前制备工作平衡缓冲液以平衡聚焦蛋白质试剂体积最终浓度平衡缓冲液预混液 760 µL DTT溶液 1M 40 µL 50 mM 总计 800 µL 样品制备将蛋白质样品溶解于按照步骤3制备的工作复水溶液中可以用工作复水溶液将样品稀释2倍或更多倍以达到想要的...

Страница 23: ... 选择 OPEN 打开 OK 确定托盘打开后放入PAGE芯片图中以浅蓝色线条表示让阳极侧朝前将溶液芯片Plus型图中以深蓝色线条表示放在PAGE芯片的顶部切角朝前涂抹溶液 6 a 7 3 4 3 b c 6 2 a 5 b 1 3 1 阴极缓冲液 4500 µL 2 蒸馏水 4500 µL 3 阳极缓冲液 4000 µL 4 工作平衡缓冲液 a 700 µL b 700 µL 可选 5 工作复水溶液 100 µL 6 样品 13 15 µL 7 滤纸和水 5 µL 每个润湿的滤纸可用作吸水纸以捕集盐分在使用 Auto2D Plus程序时建议使用滤纸来增强含高浓度盐分的蛋白质样品的分离而在使用Auto2D 除盐程序时则必须使用滤纸滤纸的厚度应为 0 2 0 3 mm 裁切成8 mm x 4 mm的尺寸放置电极芯片Plus型将朝前 IEF芯片撕掉I...

Страница 24: ...们不承担任何责任联系信息如想查找离您最近的办公地点请浏览 SigmaAldrich com offices 技术支持请浏览我们网站上的技术服务页 SigmaAldrich com techservice 标准保修可在SigmaAldrich com terms上找到本出版物所列产品的现行保修条款 한국어 Korean 사용 용도 Auto2D 전기영동 기기는 2D 전기영동 과정을 완전히 자동화하여 일차로 등전점 그리고 이차로 분자량으로 단백질을 분리합니다 완전한 단백질 분리는 1시간 조금 넘게 소요됩니다 내용물 Auto2D 전기영동 기기 전기 전원 케이블 일본 및 북미용 전원 케이블 일본 및 북미용 3P 2P 전환 플러그 유럽용 전원 케이블 중국용 전원 케이블 영국용 전원 케이블 필요품 미포함 카탈로그 번호는 제품 주문 52페이지...

Страница 25: ...을 가열하지 말 것 단백질 정량 0 1 100 µg 사이의 단백질을 2D 전기영동을 위해 적재할 수 있습니다 단백질의 최적 용량은 검출법 및 시료 복잡성에 달려 있습니다 다음 단백질 용량은 시작점일 뿐이며 사용자는 특정 시료에 대한 적재량을 최적화해야 합니다 Coomassie Brilliant Blue 염색 50 µg 형광 염색 10 µg 실버 염색 5 µg 형광 사전표지법 3 µg 단백질 분리를 위해 S M 또는 L 제조법형을 사용할지 정하도록 용액 칩에 적재된 단백질의 용량을 사용하십시오 기기에 적용되는 시료 용적은 13 15 µL입니다 시료는 필요에 따라서 작업 재수화 용액으로 희석될 수 있습니다 Auto2D 기기 전원 공급 귀하 국가의 전원 콘센트와 호환되는 적절한 전원 코드 해당 기기와 함께 제공됨...

Страница 26: ...하고 증류수로 세정하십시오 3 주걱으로 카세트를 개방합니다 4 한 곳의 모서리를 소량 절단하여 젤의 방향을 표시합니다 이렇게 하면 젤에서 알칼리와 산성 쪽 그리고 높고 낮은 분자량의 위치 파악을 돕습니다 아래 참조 고분자량 저분자량 산성 알칼리 세척 사용 후 즉시 증류수로 전극 칩 플러스를 세척하고 공기로 건조하십시오 전원 끄기 MENU EXIT APPLICATION OK SYSTEM OS SHUT DOWN OK를 선택합니다 해당 기기 후면의 스위치를 끄십시오 참고사항 기기 내부에서 결로현상을 관찰하는 경우 전원을 끄기 이전에 한 동안 트레이를 개방하여 내부가 건조하도록 합니다 폐기 시료에 노출된 구성품은 생물학적 폐기물과 함께 폐기합니다 다른 재료는 적용되는 모든 국제적 연방 주 및 지역 규정에 따라서 폐...

Страница 27: ...liporeSigma in the U S and Canada Product Ordering Purchase online at SigmaAldrich com Description Qty Catalogue Number Auto2D Device 1 BM 100 Reagent Kits Tris Glycine Reagent Kit 1 BM 1RYSJ1 Tris Tricine Reagent Kit 1 BM 1RYTJ1 PAGE Chip Gel Concentration T 6 5 10 BM 12065 7 5 10 BM 12075 10 0 10 BM 12100 12 5 10 BM 12125 Description Qty Catalogue Number Solution Chip Solution Chip Plus 10 BM 1S...

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