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20424816 Rev 06/21
20424816 Rev 06/21
German
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Vorbereitung
Reagenzien
1. Zur Vorbereitung und Aufbewahrung
der Reagenzienkits beachten Sie
bitte die Anweisungen in der mit den
Kits gelieferten Literatur oder in der
ausführlichen Bedienungsanleitung
(online).
2. Lassen Sie die folgenden Produkte,
die bei niedrigen Temperaturen
aufbewahrt werden, etwa 10 Minuten auf
Raumtemperatur (20–25 °C) aufwärmen.
• IEF-Chip
• PAGE-Chip
• Rehydrierlösung
• DTT-Lösung
• Ampholyt
3. Bereiten Sie die Rehydrier-Arbeitslösung
zur Rehydrierung des IEF-Chips und
Extraktion/Verdünnung der
Proteinprobe vor:
Reagenzien
Volumen Endkonzentration
Rehydrierlösung
189 µl
DTT-Lösung (1 M) 10 µl
50 mM
Ampholyt*
1–2 µl
0,5–1 % v/v
Gesamtvolumen
200 µl
* Wählen Sie den Ampholyten nach
dem pH-Bereich des IEF Chips.
Für Ampholyten in einer
Stammkonzentration von 40 %, geben
Sie 1 µl zu. Für Ampholyten in einer
100X-Konzentration geben Sie 2 µl zu.
4. Bereiten Sie den Äquilibrier-Arbeitspuffer
zur Äquilibrierung fokussierter Proteine
vor der SDS-PAGE vor.
Reagenzien
Volumen Endkonzentration
Äquilibrierpuffer-
Vormischung
760 µl
DTT-Lösung (1 M) 40 µl
50 mM
Gesamtvolumen
800 µl
Probenvorbereitung
Lösen Sie die Proteinprobe in der gemäß
Schritt 3 zubereiteten Rehydrier-Arbeitslösung.
Die Probe kann 2-fach oder stärker mit
Rehydrier-Arbeitslösung verdünnt werden,
um die gewünschte Proteinkonzentration
zu erhalten und die Salzkonzentration
zu verringern.
Eine hohe Salzkonzentration kann die
Proteintrennung während der isoelektrischen
Fokussierung beeinträchtigen und die
Stromstärke auf über 100 µA erhöhen. Proben
mit hoher Salzkonzentration sollten entsalzt
werden durch:
TCA/Acetonausfällung und Resuspendierung
der Proteine in Rehydrier-Arbeitslösung
ODER
Pufferaustausch unter Anwendung
einer Spinsäule
ODER
Anwendung des Auto2D
®
Entsalzungsprotokolls (weitere
Informationen finden Sie in der
ausführlichen Bedienungsanleitung online.)
HINWEIS:
Vermeiden Sie bei der
Protein-Resuspendierung eine Erwärmung
der Proteine über 37 °C.
Quantifizieren Sie die Proteine. Für die
2D-Elektrophorese können zwischen
0,1 und 100 µg Protein geladen werden.
Die optimale Proteinmenge hängt
von der Detektions-methode und der
Probenkomplexität ab. Die folgenden
Proteinmengen sind als Ansatzpunkt zu
verwenden. Die Anwender müssen die
Lademenge ggf. für ihre bestimmte
Probe optimieren.
• Coomassie Brillantblau-Färbung: 50 µg
• Fluoreszenzfärbung: 10 µg
• Silberfärbung: 5 µg
• Fluoreszenz-Vormarkierung: 3 µg
Bestimmen Sie anhand der in den LösungsChip
gegebenen Proteinmenge, ob Sie eine
S-, M- oder L-Rezeptur verwenden.
Das in das Gerät gegebene Probenvolumen
beträgt 13–15 µl. Die Probe kann bei Bedarf
mit Rehydrier-Arbeitslösung verdünnt werden.
Schalten Sie das Auto2D
®
Gerät ein
Wählen Sie das Netzkabel (im Lieferumfang
enthalten), das mit den Steckdosen in
ihrem Land kompatibel ist. Stecken Sie das
Geräteende des Kabels fest auf der Rückseite
des Auto2D
®
Geräts und das andere Ende in
die Wandsteckdose ein.
Der Netzschalter befindet sich neben dem
Wechselstromeingang auf der Rückseite des
Auto2D
®
Geräts. Drücken Sie den Netzschalter,
um das Gerät einzuschalten.
Die Anwendung wird automatisch gestartet.
Wählen Sie auf dem Bildschirm den Auto2D
®
Plus-Modus.
Laden Sie eine Rezeptur
Wählen Sie SETTING > RECIPE
[EINSTELLUNG > REZEPTUR]. Berühren
Sie den Rezeptur-Informationsbildschirm.
Das Dialogfenster zur Auswahl einer
Rezeptur wird eingeblendet.
Wählen Sie den Rezepturnamen > LOAD >
OK > EXIT [LADEN > OK > VERLASSEN].
Hinweis:
Bestätigen Sie, dass der gewünschte
Rezepturname oben rechts am Bildschirm
angezeigt wird.
Chip-Vorbereitung
PAGE-Chip
Kathodenseite
Anodenseite
5. Entfernen Sie das weiße Klebeband
auf der Anodenseite des Chips.
6. Entfernen Sie vorsichtig die
Kunststoffabdeckung auf der
Kathodenseite des Chips.
7. Spülen Sie die Anoden- und
Kathodenpufferkanäle behutsam mit
destilliertem Wasser. Wischen Sie jegliche
Flüssigkeit mit einem Papierhandtuch
vorsichtig von der Oberseite des Chips
und achten Sie dabei darauf, dass der
dünne Gelstreifen auf der Kathodenseite
des Chips nicht beschädigt wird.
Legen Sie die Chips in die
Schublade ein
Wählen Sie auf dem Touchscreen des Auto2D
®
Geräts OPEN > OK [ÖFFNEN > OK]. Wenn
die Schublade geöffnet ist, legen Sie den
PAGE-Chip
(hellblaue Kontur)
mit der
Anodenseite nach vorn ein. Legen Sie den
LösungsChip Plus
(dunkelblaue Kontur)
mit
den abgeschnittenen Ecken nach vorn auf
den PAGE-Chip.
