20
21
20424816 Rev 06/21
20424816 Rev 06/21
Dutch
Dutch
Preparatie
Reagentia
1. Prepareer en bewaar Reagent Kits
zoals aangegeven in de bij de kits
meegeleverde literatuur, of de volledige
Gebruikershandleiding (online).
2. Laat de volgende producten die op een
lage temperatuur zijn opgeslagen, op
kamertemperatuur komen (20–25 °C
ongeveer 10 minuten).
• IEF Chip
• PAGE Chip
• Rehydration Solution
• DTT Solution
• Amfolyt
3. Prepareer de Working Rehydration
Solution
voor rehydratatie van IEF Chip en
extractie/verdunning van eiwitmonster:
Reagentia
Volume
Definitieve
c
oncentratie
Rehydration
Solution
189 µl
DTT Solution
(1 M)
10 µl
50 mM
Amfolyt*
1–2 μl
0,5–1% v/v
Totaal
200 µl
* Selecteer amfolyt op basis van
IEF Chip. Voeg voor amfolyten met
40% stockconcentratie, 1 µl toe. Voeg
voor amfolyten met 100X, 2 µl toe.
4. Prepareer Working Equilibration Buffer
voor equilibratie van geconcentreerde
eiwitten voor SDS-PAGE.
Reagentia
Volume
Definitieve
c
oncentratie
Equilibration
buffer premix
760 µl
DTT Solution
(1 M)
40 µl
50 mM
Totaal
800 µl
Monsterpreparatie
Los het eiwitmonster op in de
Working Rehydration Solution, geprepareerd
volgens stap 3. Het monster mag 2 maal
of meer verdund worden met Working
Rehydration Solution om de gewenste
eiwitconcentratie te bereiken en de
zoutconcentratie te verlagen.
Een hoge zoutconcentratie kan eiwitscheiding
beïnvloeden tijdens isoelektrische concentratie
en de stroom 100 µA doen overschrijden.
Monsters met een hoge zoutconcentratie
dienen ontzout te worden door middel van:
TCA/aceton precipitatie en resuspensie van
eiwitten in working rehydration solution
OF
Buffer uitwisseling door middel van
een spinkolom
OF
Ontzoutingsprotocol met Auto2D
®
Device
(zie volledige Gebruikershandleiding voor
meer informatie.)
LET OP:
Tijdens eiwitresuspensie dient u de
eiwitten niet boven de 37 °C te verhitten.
Eiwitten kwantificeren. Tussen 0,1–100 µg eiwit
kan worden geladen voor 2D elektroforese. De
optimale hoeveelheid eiwit is afhankelijk van
de detectiemethode en monstercomplexiteit.
De volgende eiwit hoeveelheden dienen als
startpunt te worden gebruikt, de gebruiker kan
de laadhoeveelheid optimaliseren voor hun
eigen monster.
• Coomassie Brilliant Blue staining: 50 µg
• Fluorescent staining: 10 µg
• Silver staining: 5 µg
• Fluorescent pre-labeling: 3 µg
Gebruik de hoeveelheid eiwit die in de
Solution Chip is geladen om te bepalen
of u het S, M, of L proceduretype voor
eiwitscheiding moet gebruiken,
Het geappliceerde monstervolume op het
apparaat is 13–15 µl. Het monster kan worden
verdund met Working Rehydration Solution,
indien noodzakelijk.
Inschakelen van Auto2D
®
Device
Selecteer het geschikte stroomsnoer
(meegeleverd met het apparaat) dat
compatibel is met de stopcontacten in uw land.
Duw het juiste uiteinde stevig in de achterkant
van het Auto2D
®
Device, en het andere
uiteinde in het stopcontact.
De stroomschakelaar bevindt zich naast de AC
plugpoort achterop het Auto2D
®
Device. Druk
de schakelaar omhoog om in te schakelen.
De applicatie wordt automatisch gestart.
Selecteer op het scherm de Auto2D
®
Plus
modus.
Laad een procedure
Kies SETTING (instelling) > RECIPE (recept).
Raak het Recipe Information scherm aan.
Selectie dialoogvak voor procedure verschijnt.
Selecteer ”RECIPE NAME” (procedure naam) >
LOAD (laden) > OK > EXIT (afsluiten).
Let op:
Bevestig dat de gewenste
Procedurenaam rechtsbovenin het scherm
wordt getoond.
Chip Montage
PAGE Chip
E Chip
Kathodezijde
Anodezijde
1. Verwijder de witte tape op de anodezijde
van de Chip.
2. Verwijder voorzichtig de plastic folie op de
kathodezijde van de Chip.
3. Spoel de anode en kathodebuffer zachtjes
af met gedestilleerd water. Veeg met
een papieren reinigingsdoekje eventuele
vloeistof van de bovenkant van de Chip af,
waarbij u erop let de dunne strip op
de kathodezijde van de Chip niet
te beschadigen.
Plaats de Chips in de bak
Op het Auto2D
®
Device touch screen, kiest
u OPEN > OK. Zodra de bak is geopend,
plaatst u de PAGE Chip
(lichtblauwe streep)
met de anodezijde naar voren. Plaats de
Solution Chip Plus
(donkerblauwe strepen)
bovenop de PAGE Chip met de cut-off hoekjes
naar voren.
