Agilent Technologies AdvanceBio Amino Acid Analysis, User Manual

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Auswahl der mobilen Phase und
Betriebstemperaturen
Gebundene stationäre Phasen sind unpolar und sind am besten in
Kombination mit polaren mobilen Phasen wie z. B. Methanol/Wasser-
oder Acetonitril/Wasser-Mischungen zu verwenden. Eine Erhöhung des
organischen Anteils verkürzt die Retentionszeit der Probe.
Wenn Sie die Säule längere Zeit bei maximaler Temperatur einsetzen,
verkürzt sich ihre Lebensdauer.
Die Verwendung von rein wässrigen Eluenten in PLRP-S-Säulen führt zu
einer deutlichen Verkürzung der Lebensdauer und kann eine schnelle
Verschlechterung der Peakbreite und -symmetrie bewirken.
Empfohlene Anfangsgradienten
Die Trennung von biologischen Molekülen erfolgt in der Regel mithilfe von
Gradientenelution: Der Anteil der organischen Komponente wird dabei
allmählich erhöht, um die Elution von der Säule zu erreichen. Trennungen
von Peptiden, Polypeptiden und Proteinen werden meistens unter
Verwendung saurer Eluenten mit Trifluor essigsäure (TFA) oder
Ameisensäure (FA) als Modifizierungsmittel zur pH-Steuerung und/oder
als Ionenpaar-Additiv durchgeführt, um die gewünschte Retention und
Selektivität zu erzielen. Für die Elution werden organische Lösungsmittel
wie Acetonitril, Methanol und Ethanol verwendet, am häufigsten
Acetonitril.
Weiterführende Informationen über die Peptidtrennung finden Sie in Kapitel 11, S.
497 bis 508 des Buches „Introduction to Modern Liquid Chromotography, Second
Edition“ von L.R. Snyder und J. J. Kirkland, (John Wiley & Sons, 1979).
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