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Introduzione al contrasto di fase

I preparati senza alcuna colorazione che non assorbono luce sono chiamati “oggetti di fase”, poiché alterano

leggermente la fase della luce che li attraversa, ritardandola tipicamente di 1/4 di lunghezza d’onda rispetto alla

luce diretta che passa non deviata intorno al campione. Sfortunatamente i nostri occhi, come i sensori delle te-

lecamere, non sono in grado di apprezzare queste differenze di fase. L’occhio umano è sensibile solo ai colori

dello spettro visibile (variazioni nella frequenza della luce) o a differenti livelli di intensità luminosa (variazioni

nell’ampiezza dell’onda luminosa).

Negli oggetti di fase, l’ “ordine zero” della luce passa attraverso o intorno al campione non essendo deviata. La

luce diffratta dall’oggetto non è ridotta in ampiezza (come nei campioni opachi), ma è rallentata (ritardo di fase)

in funzione dell’indice di rifrazione e dello spessore del campione. Questa luce diffratta, rallentata di circa 1/4 di

lunghezza d’onda, arriva sul piano dell’immagine fuori fase rispetto alla luce diretta non deviata, ma essenzial-

mente non ridotta in intensità. Il risultato è che l’immagine a livello dell’oculare manca di contrasto e i dettagli del

campione sono quasi invisibili.

Zernike ebbe successo nel mettere a punto un metodo, ora noto come Microscopia a Contrasto di Fase, che

consente di ottenere immagini contrastate di oggetti di fase trasparenti, come se fossero campioni opachi.

Un’illustrazione schematica della configurazione di un microscopio a contrasto di fase è mostrata in figura 1.

Anello di Fase

Luce

deviata

Obiettivo

Vetrino porta preparato

Condensatore

Diaframma

ad anello

Sorgente luminosa

Figura 1

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Страница 1: ...Version 2 Issued 18 08 2014 Model B 380 B 500 B 800 B 1000 Phase contrast INSTRUCTION MANUAL...

Страница 2: ...Page 2 Table of Contents Introduction to phase contrast Setup on B 380 microscopes Setup on B 500 B 800 B 1000 microscopes...

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Страница 10: ...aque specimen will make alignment easier Using the 10x objective center your sample moving the stage and focus using the coarse and fine focus knobs Rotate the condenser height adjustment knobs until...

Страница 11: ...screw Typically you have to see a pair of rings one brighter and one darker The bright one is the image of the an nulus on the condenser while the dark one is the phase ring inside the objective Press...

Страница 12: ...tion Reinsert the eyepiece Now you can look at the phase contrast image of your sample The same procedure must be followed to align the other objectives 20x 40x or 100x Note that in order to ob tain a...

Страница 13: ...Modello B 380 B 500 B 800 B 1000 Contrasto di fase MANUALE D ISTRUZIONI Versione 2 Emesso il 18 08 2014...

Страница 14: ...Pagina 14 Indice Contenuti Introduzione al contrasto di fase Set up su microscopi B 380 Set up sui microscopi B 500 B 800 B 1000...

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Страница 19: ...mente saranno visibili due anelli uno pi chiaro ed uno pi scuro Quello chiaro l immagine del dia framma ad anello del condensatore mentre l anello scuro rappresenta l anello di fase dentro l obiettivo...

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Страница 21: ...Assicurarsi di aver montato sul revolver un set di obiettivi a contrasto di fase sono marcati con PH sul corpo Abbassare il condensatore usando l apposita manopola Sostituire il condensatore standard...

Страница 22: ...l allineamento Usando l obiettivo 10x centrare il campione muovendo il tavolino traslatore e mettere a fuoco usando le manopole macro e micrometrica Ruotare la manopola di regolazione dell altezza co...

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Страница 24: ...iposo Reinserire l oculare Ora possibile visualizzare l immagine a contrasto di fase del campione La stessa procedura va seguita per allineare gli altri obiettivi 20x 40x 100x Notare che per ottenere...

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Страница 27: ...Modelo B 380 B 500 B 800 B 1000 Contraste de fases MANUAL DE INSTRUCCIONES Versi n 2 Publicado 18 08 2014...

Страница 28: ...P gina 28 Indice Introducci n al contraste de fases Instalaci n sobre microscopio B 380 Instalaci n sobre microscopios B 500 B 800 B 1000...

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Страница 41: ...Mod le B 380 B 500 B 800 B 1000 Contrasto di fase MANUEL D UTILISATION Version 2 du 18 08 2014...

Страница 42: ...Page 42 Indice Contenuti Introduction au contraste de phase Installation sur les microscopes de la s rie B 380 Installation sur les microscopes de la s rie B 500 B 800 et B 1000...

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Страница 53: ...Modelo B 380 B 500 B 800 B 1000 Contraste de fase MANUAL DE INSTRU ES Vers o 2 Emitido em 18 08 2014...

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Страница 63: ...mente ser o vis veis dois an is um mais claro e um mais escuro Aquele claro a imagem do dia fragma a anel do condensador enquanto que o anel escuro representa o anel de fase dentro da objetiva Pressio...

Страница 64: ...de repouso Substitua o ocular Agora voc pode ver a imagem de contraste de fase da amostra O mesmo procedimento deve ser seguido a fim de alinhar os outros objectivos 20x 40x 100x Note se que para obte...

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Страница 67: ...Modell B 380 B 500 B 800 B 1000 Phasenkontrast ANLEITUNG Version 2 Ausgestellt am 18 08 2014...

Страница 68: ...Pagina 68 Inhaltsangabe Einf hrung zum Phasenkontrast Set up Mikroskope B 380 Set up Mikroskope B 500 B 800 B 1000...

Страница 69: ...e Probe herum Das vom Objekt gebeugte Licht wird wie bei dunklen Proben nicht in der Amplitude eingeschr nkt sondern abh ngig von Brechungsindex und Dicke der Probe verlangsamt Phasenverschiebung Dies...

Страница 70: ...rast bezeichnet Abbildung 3 Das f r das Funktionieren des Phasenkontrastes erforderliche Zubeh r ist ein unter dem Tisch zu positionieren der Kondensator der mit einer Ringblende ausger stet ist und e...

Страница 71: ...cherstellen dass am Revolver eine Satz Phasenkontrast Objektive angebracht ist am K rper mit PH gekennzeichnet Kondensor mithilfe des entsprechenden Griffs senken Standard Hellfeldkondensor durch eine...

Страница 72: ...nkle Probe erleichtert die Zentrierung Die Probe mithilfe des 10x Objektivs indem der Schiebetisch bewegt wird zentrieren und mit den Grob und Feineinstellung scharf stellen Den Einstellgriff f r die...

Страница 73: ...bis das Bild der Phasenringe scharf gestellt ist Typischerweise sind zwei Ringe sichtbar ein hellerer und ein dunklerer Der hellere ist das Bild der Konden sor Ringblende w hrend der dunkle Ring den...

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Страница 76: ...die Zentrierung Die Probe mithilfe des 10x Objektivs indem der Schiebetisch bewegt wird zentrieren und mit der Grob und Feineinstellung scharf stellen Den Einstellgriff f r die Kondensorh he so lange...

Страница 77: ...chlie end wieder anziehen Typischerweise sind zwei Ringe sichtbar ein hellerer und ein dunklerer Der hellere ist das Bild der Konden sor Ringblende w hrend der dunkle Ring den Phasenring im Objektiv r...

Страница 78: ...die Ruheposition Okular wieder einsetzen Jetzt kann das Phasenkontrastbild der Probe dargestellt werden F r die Zentrierung der anderen Objektive 20x 40x 100x auf dieselbe Weise vorgehen Um mit dem 10...

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Страница 80: ...BG ITALIA Tel 39 035 571 392 Fax 39 035 571 435 info optikamicroscopes com www optikamicroscopes com Optika Sales branches OPTIKA Spain spain optikamicroscopes com OPTIKA USA usa optikamicroscopes com...

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