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A amostra demonstra um excelente contraste quando a luz difratada e a luz direta (não desviada) estão defa-
sadas em 1/2 de comprimento de onda. O método de Zernike consiste no defasar adicionalmente também a
luz direta de 1/4 de comprimento de onda, de modo que a diferença entre luz difratada e direta seja de 1/2 de
comprimento de onda. Como resultado, os dois componentes de luz produzem uma interferência destrutiva no
plano de imagem do óculo. Este procedimento produz uma imagem com detalhes mais escuros sobre um fundo
mais claro. Esta tipologia é chamada de contraste de fase positivo (figura 2).
Uma segunda variante consiste no defasar a luz direta sempre de 1/4 de comprimento de onda mas de modo
que chegue em fase no plano de imagem com a luz difratada, causando portanto uma interferência construtiva.
Este procedimento produz uma imagem com detalhes mais claros sobre um fundo mais escuro. Esta tipologia
é dita contraste de fase negativo (figura 3).
Os acessórios pedidos para o funcionamento em contraste de fase são um condensador a colocar sob a mesa,
equipada com diafragmas de anel e um conjunto de objetivas para contraste de fase, cada um deles equipado
com uma lâmina de fase em anel. O fornecimento inclui também um filtro verde (para aumentar a resolução) e
um telescópio de centragem (para centrar os anéis).
As técnicas de microscopia de fase são especialmente úteis com amostras finas e distribuídas no campo visual.
Existem algumas limitações nessa técnica:
•
As imagens de fase são normalmente afetadas por halos em redor das bordas dos detalhes.
Esses halos são artefatos ópticos, que podem obscurecer ocasionalmente as fronteiras entre detalhes
adjacentes.
•
Os anéis de fase limitam a abertura numérica do sistema óptico, reduzindo (minimamente) a resolução.
•
O contraste de fase não funciona ao seu melhor com amostras espessas, pois as variações de fase
ocorrem em zonas pouco acima ou abaixo do plano de focagem.
• As imagens de fase aparecem cinza quando é usada uma luz branca, e verdes quando é inserido o
filtro verde.
Figura 2
Figura 3
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