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Versión/Version 1, Sept 2017
8.
Tinción y visualización del gel
1.
Coloque el gel durante 15
–
30 min en una cubeta de tinción con el volumen adecuado de
solución de bromuro de etidio 0.5ug/ml (ver el punto
6. Soluciones
). La cubeta de tinción
debe estar cerrada.
Nota:
el bromuro de etidio es una sustancia cancerígena por lo que será necesario tomar
las precauciones necesarias para su manipulación.
2.
Deje el gel en agua destilada durante unos 10 - 30 min para eliminar el exceso de tinción
asegurándose de que queda completamente sumergido.
3.
Enjuague dos veces el gel en agua destilada durante un par de segundos.
4.
Coloque el gel en un transiluminador de luz UV.
5.
Las muestras se verán como bandas claras y brillantes al ser visualizadas o fotografiadas
en con un sistema de documentación de geles. Si las bandas se ven débiles habrá que
ajustar el proceso de tinción con bromuro de etidio reduciendo el tiempo de lavado, si por
el contrario se observa demasiado fondo, habrá que aumentar el tiempo de aclarado del
gel.
9.
Soluciones
1x TAE
–
40 mM tris (PH 7.6), 20 mM ácido acético, 1 mM EDTA.
Para 1 L de TAE 50X disolver en 750 mL de agua destilada:
•
242 g tris base (FW=121)
•
57.1 mL ácido acética glacial
•
100 mL EDTA 0.5 M (PH 8.0)
•
Completar hasta 1 L con agua destilada
1X TBE
–
89 mM tris (PH 7.6), 89Mm ácido bórico, 2mM EDTA
Para 1 L de TBE 10x disolver en 750 mL de agua destilada:
•
108 g tris base (FW=121)
•
55 g ácido bórico (FW=61.8)
•
40 mL EDTA 0.5 M (PH 8.0)
•
Completar hasta 1 L con agua destilada.
Solución de carga
