B59380–AD
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Spécifications
Solution de Lyse VersaLyse prête à l’emploi
Forme
Liquide
Volume
100 mL
Nombre de flacons
1 flacon
Volume par test
1 mL (prêt à l’emploi dans une utilisation sans fixation concomitante)
VersaLyse
Solution de Lyse
1 mL / test, A09777 100 tests ; 100 mL
Réservé aux dosages diagnostiques
in vitro
UTILISATION
Ce réactif est destiné à la lyse des globules rouges lors de la préparation d’échantillons biologiques pour l’analyse
par cytométrie en flux. VersaLyse est compatible avec tous types de cytomètres et s’utilise avec ou sans lavage
après incubation, dans la mesure où on emploie des anticorps fluorescents dûment calibrés pour le protocole
choisi. VersaLyse permet en outre de traiter les échantillons même lorsqu’ils ont été préalablement lavés afin, par
ex., d’éliminer les immunoglobulines sériques (1,2,3,4,5).
PRINCIPE
L’échantillon contenant les hématies à lyser est mis en présence du réactif VersaLyse pendant au moins 10
minutes.
Le composant actif majeur de VersaLyse est une amine cyclique qui, au contact de l’anhydrase
carbonique contenue dans les hématies, se transforme en un composé hautement lytique pour ces cellules.
Ce réactif s’utilise avec des anticorps conjugués spécifiques qui ont la capacité de se fixer sur des cellules
leucocytaires par les déterminants antigéniques qu’elles expriment. Le marquage spécifique des leucocytes est
réalisé en incubant l’échantillon avec le ou les anticorps. Les érythrocytes sont ensuite éliminés par lyse et les
leucocytes, non affectés par cette étape, sont analysés par cytométrie en flux.
Les préparations doivent être conservées entre 2 et 8 °C et rapidement analysées au cytomètre en flux. En cas de
report de l’analyse de quelques heures, elles peuvent être fixées avec du PBS contenant 0,1 % de formaldéhyde
(Voir la fiche technique de la Solution de Fixation IOTest 3 – Réf. A07800 –pour préparer ce PBS à 0,1 % de
formaldéhyde). Dans ce cas, un lavage préalable est nécessaire.
Le cytomètre en flux mesure la diffusion de la lumière ainsi que la fluorescence des cellules. Il permet de
circonscrire la population d’intérêt à l'intérieur d’une fenêtre électronique définie sur un histogramme qui corrèle la
diffusion orthogonale de la lumière ("Side Scatter" ou SS) et la diffusion de la lumière aux petits angles (“Forward
Scatter” ou FS). D’autres histogrammes combinant deux des différents paramètres disponibles sur le cytomètre
sont utilisables comme supports à l’étape de fenêtrage électronique en fonction de l’application choisie par
l’utilisateur.
La fluorescence des cellules ainsi fenêtrées est analysée pour distinguer les événements positivement marqués
des événements non marqués. Les résultats sont exprimés en pourcentage d’événements positifs par rapport à
l'ensemble des événements pris en compte par le fenêtrage électronique.
AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS
1. Ne pas utiliser le réactif au-delà de la date de péremption.
2. Ne pas mettre au réfrigérateur, ne pas congeler.
3. Minimiser les temps d’exposition à la lumière pendant les incubations avec les anticorps fluorescents.
4. Eviter la contamination microbienne des réactifs ou des résultats erronés peuvent apparaître.
5. Le formaldéhyde est toxique et allergénique. On le suspecte d’être un agent carcinogène Ne jamais pipeter
à la bouche et éviter tout contact avec la peau, les muqueuses, les yeux et les vêtements.
6. Tout échantillon sanguin doit être considéré comme potentiellement infectieux et doit être manipulé avec les
précautions d'usage (en particulier : port de gants, de blouse et de lunettes de protection).
7. Les tubes de sang et le matériel à usage unique ayant servi à la manipulation doivent être éliminés dans des
conteneurs ad hoc destinés à l'incinération.