B59380–AD
68 of 135
Specyfikacja
Gotowy do użycia roztwór do lizy VersaLyse Lysing Solution
Postać
Ciecz
Objętość
100 mL
Liczba fiolek
1 fiolka
Objętość na test
1 mL (gotowy do użycia przy zastosowaniu bez równoczesnego
utrwalania)
VersaLyse
Roztwór do lizy
1 mL / test, A09777 100 testów; 100
mL
Do
in vitro
użycia diagnostycznego
ZASTOSOWANIE
Odczynnik ten przeznaczony jest do lizy czerwonych ciałek krwi w procesie przygotowania próbek biologicznych do
analizy metodą cytometrii przepływowej. VersaLyse jest kompatybilny ze wszystkimi typami cytometrów i stosuje
się go z lub bez płukania po inkubacji, o ile w protokole wykorzystywane są właściwie skalibrowane przeciwciała
fluorescencyjne. VersaLyse umożliwia również obróbkę wcześniej płukanych próbek, na przykład w celu eliminacji
immunoglobulin osocza (1,2,3,4,5).
ZASADA
Próbka, zawierająca czerwone ciałka krwi do lizy wystawiana jest na kontakt z odczynnikiem VersaLyse na
przynajmniej 10 minut. Głównym aktywnym składnikiem VersaLyse jest cykliczna amina, która w kontakcie z
anhydrazą węglanową obecną w erytrocytach przekształca się w związek bardzo skutecznie powodujący ich lizę.
Odczynnik ten stosowany jest ze swoistymi skoniugowanymi przeciwciałami, zdolnymi do wiązania się z
leukocytami dzięki eksprymowanym przez nie determinantom antygenowym.
Swoiste barwienie leukocytów
uzyskuje się przez inkubację próbki z przeciwciałem lub przeciwciałami. Czerwone krwinki usuwane są następnie
przez lizę, a leukocyty, odporne na ten proces, poddawane są analizie metodą cytometrii przepływowej.
Przygotowane próbki muszą być przechowywane w temperaturze 2 – 8°C i niezwłocznie poddane analizie metodą
cytometrii przepływowej. W przypadku kilkugodzinnego opóźnienia przed analizą, można je utrwalić buforem PBS
zawierającym 0,1% formaldehydu (sposób przygotowania PBS z 0,1% formaldehydu opisano w ulotce technicznej
roztworu utrwalającego IOTest 3 Fixative Solution – Odn. A07800). W tym przypadku wcześniejsze płukanie nie
jest konieczne.
Cytometr przepływowy mierzy rozproszenie światła i fluorescencję komórek. Umożliwia to określenie istotnej
populacji w ramach elektronicznego okna zdefiniowanego na histogramie, które koreluje z rozproszeniem światła
w bok (Side Scatter, SS) oraz w osi wiązki (Forward Scatter, FS). Jako pomoc na etapie bramkowania można
wykorzystać inne histogramy dwuparametrowe dostępne na cytometrze, w zależności od zastosowania wybranego
przez użytkownika.
Fluorescencja określonych komórek jest analizowana w celu odróżnienia zdarzeń o odczynie dodatnim od nie
wybarwionych.
Wyniki wyrażane są jako procent zdarzeń pozytywnych w stosunku do wszystkich zdarzeń
zarejestrowanych przez bramkowanie.
OSTRZEŻENIE I ŚRODKI OSTROŻNOŚCI
1. Nie używać odczynnika po upłynięciu daty ważności.
2. Nie przechowywać w lodówce, nie zamrażać.
3. Ograniczyć do minimum kontakt ze światłem podczas inkubacji z przeciwciałami fluorescencyjnymi.
4. Unikać bakteryjnego skażenia odczynników, co może prowadzić do nieprawidłowych odczytów.
5. Formaldehyd jest związkiem toksycznym i alergennym. Uważa się go za rakotwórczy. Nie wolno pipetować
ustami. Unikać wszelkiego ze skórą, śluzówkami i oczami.
6. Wszystkie próbki krwi muszą być uznawane za potencjalne źródło zakażeń i ostrożnie traktowane (w
szczególności: należy nosić ochronne rękawiczki, fartuchy i okulary).
7. Probówki z krwią i materiały jednorazowe mające z nią kontakt należy wyrzucać do specjalnych pojemników
przeznaczonych do spalenia.