B59380–AD
58 of 135
Specifikacijos
Paruoštas naudoti lizavimo tirpalas „VersaLyse“
Būsena
Skystis
Tūris
100 ml
Buteliukų skaičius
1 buteliukas
Vieno bandymo tūris 1 ml (paruošta naudoti, jeigu tuo pačiu metu neatliekamas fiksavimas)
lizavimo tirpalas
Lizinis tirpalas
1 ml bandymui, A09777 100 bandymų;
100 ml
Skirta
in vitro
diagnostikos tyrimams
PASKIRTIS
Šis reagentas skirtas raudoniesiems kraujo kūneliams lizuoti, ruošiant srovinės citometrijos analizės biologinius
mėginius.
Jeigu pagal protokolą naudojami tinkamai sukalibruoti fluorescenciniai antikūnai, „VersaLyse“
suderinamas su visų tipų citometrais ir gali būti naudojamas po inkubacijos su plovimu arba be jo.
Su
„VersaLyse“ mėginius taip pat galima apdoroti, net jeigu jie plauti anksčiau, pavyzdžiui, siekiant pašalinti serumo
imunoglobuliną (1,2,3,4,5).
PRINCIPAS
Mėginys su lizuojamais raudonaisiais kraujo kūneliais „VersaLyse“ reagentu veikiamas mažiausiai 10 minučių.
Pagrindinė „VersaLyse“ aktyvioji sudedamoji dalis yra ciklinis aminas, kuris kontaktuodamas su raudonuosiuose
kraujo kūneliuose esančia anglies anhidraze virsta šias ląsteles itin stipriai lizuojančiu junginiu.
Šis reagentas naudojamas su specifiniais konjuguotaisiais antikūnais, kurie gali prisijungti prie leukocitų dėl
pastarųjų epitopų. Specifinis leukocitų nusidažymas pasiekiamas mėginį inkubuojant su vienos ar kelių rūšių
antikūnais. Tada raudonieji kūneliai pašalinami lizuojant, o šio proceso nepaveikti leukocitai analizuojami srovinės
citometrijos metodu.
Preparatai turi būti laikomi 2–8 °C temperatūroje ir greitai išanalizuojami taikant srovinę citometriją. Jeigu analizė
kelioms valandoms atidedama, preparatus galima fiksuoti PBS su 0,1 % formaldehido („IOTest 3“ fiksavimo tirpalo
techniniame lankstinuke rasite informacijos, kaip paruošti šį PBS su 0,1 % formaldehido – REF A07800). Šiuo
atveju reikia atlikti išankstinį plovimą.
Sroviniu citometru matuojama ląstelių šviesos difuzija ir fluorescencija. Taip elektroniniame lange, apibrėžiamame
šviesos difuzijos statmenąja kryptimi (šoninė sklaida, arba SS (angl. Side Scatter) ir siauro kampo šviesos
difuzijos (priekinės sklaidos, arba FS (angl. Forward Scatter) koreliacijos histograma, galima apriboti dominančią
populiaciją.
Kitas dviejų (iš įvairių galimų) citometro parametrų histogramas galima naudoti kaip pagalbą
strobavimo etape, atsižvelgiant į naudotojo pasirinktą naudojimo būdą.
Siekiant atskirti pagal nusidažymą teigiamus atvejus nuo nenusidažiusių, analizuojama apribotų ląstelių
fluorescencija. Rezultatai išreiškiami teigiamų atvejų procentine dalimi pagal visus strobuojant gautus atvejus.
ĮSPĖJIMAI IR ATSARGUMO PRIEMONĖS
1. Nenaudokite reagento pasibaigus galiojimo terminui.
2. Nelaikykite šaldytuve, neužšaldykite.
3. Inkubuodami su fluorescenciniais antikūnais, kuo labiau saugokite nuo šviesos.
4. Venkite reagentų užkrėtimo mikrobais, nes galite gauti klaidingus rezultatus.
5. Formaldehidas toksiškas ir sukelia alergiją. Manoma, kad jis kancerogeninis. Jokiu būdu netraukite pipete
burna ir venkite kontakto su oda, gleivine, akimis ir drabužiais.
6. Visus kraujo mėginius būtina laikyti potencialiai užkrečiamais ir su jais dirbti atsargiai (būtent: su apsauginėmis
pirštinėmis, chalatu ir akiniais).
7. Kraujo mėgintuvėlius ir darbui naudojamas vienkartines medžiagas reikia išmesti sudėjus į specialias
deginimo talpyklas.