B59380–AD
112 of 135
Specificaţii
Soluție de lizare gata de utilizare VersaLyse
Formulă
Lichidă
Volum
100 ml
Număr de flacoane
1 flacon
Volum per test
1 ml (gata de utilizare atunci când este utilizat fără fixare concomitentă)
VersaLyse
Soluție de liză
.
1 ml/test, A09777
100 teste; 100 ml
Pentru utilizare în diagnosticarea
in vitro
UTILIZARE PREVĂZUTĂ
Acest reactiv este destinat lizării eritrocitelor în prepararea probelor biologice pentru analiza citometrică în flux. Reactivul
VersaLyse este compatibil cu toate tipurile de citometre și se utilizează cu sau fără spălare după incubare atât timp cât
în protocol sunt utilizați anticorpi fluorescenți calibrați corespunzător. De asemenea, reactivul VersaLyse permite tratarea
probelor chiar și după ce au fost spălate în prealabil, de exemplu pentru eliminarea imunoglobulinelor serice (1,2,3,4,5).
PRINCIPIU
Proba conținând eritrocite de lizat se expun la reactivul VersaLyse timp de cel puțin 10 minute. Principalul ingredient activ
al reactivului VersaLyse este o amină ciclică, care, în contact cu anhidraza carbonică prezentă în eritrocite, se transformă
într/un compus foarte litic pentru aceste celule.
Acest reactiv se utilizează cu anticorpi conjugați specifici care sunt capabili să se lege la leucocite din cauza determinanților
antigenici pe care-i exprimă. Colorarea specifică a leucocitelor se realizează prin incubarea probei cu anticorpul sau
anticorpii. Eritrocitele sunt ulterior îndepărtate prin liză, iar leucocitele, care nu sunt afectate de acest proces, sunt
analizate prin citometrie în flux.
Preparatele trebuie păstrate la o temperatură cuprinsă între 2°C și 8°C și analizate apoi imediat utilizându-se citometrie
în flux. În cazul unei întârzieri de câteva ore înainte de efectuarea analizei, preparatele pot fi fixate cu PBS conținând
0,1% formaldehidă (consultați prospectul tehnic al soluție de fixare IOTest 3 – REF A07800 – pentru prepararea acestui
PBS cu 0,1% formaldehidă). În acest caz este necesară spălare prealabilă.
Citometrul în flux măsoară difuzia luminii și fluorescența celulelor. Acesta face posibilă delimitarea populațiilor de interes
în fereastra electronică definită pe o histogramă, care corelează difuzia ortogonală a luminii (Dispersia perpendiculară
sau SS – Side Scatter) și difuzia luminii sub un unghi ascuțit (Dispersia pe direcția înainte sau FS – Forward Scatter). Alte
histograme care combină doi dintre parametrii diferiți disponibili pe citometru pot fi utilizate ca ajutor în faza de stabilire
a porților (gating) în funcție de aplicația aleasă de către utilizator.
Fluorescența celulelor delimitate se analizează pentru distingerea evenimentelor colorate pozitiv de cele necolorate.
Rezultatele sunt exprimate ca procentaj de evenimente pozitive în raport cu toate evenimentele obținute de gating.
AVERTIZĂRI ȘI MĂSURI DE PRECAUȚIE
1. A nu se utiliza reactivul după data expirării.
2. Nu depozitați în frigider; nu congelați.
3. Minimizați expunerea la lumină în timpul incubației cu anticorpi fluorescenți.
4. Evitați contaminarea microbiană a reactivilor. În caz contrar, se pot obține rezultate false.
5. Formaldehida este toxică și alergenă. De asemenea, este considerată fi cancerigenă. Nu pipetați niciodată folosind
gura și evitați orice contact cu pielea, mucoasele, ochii și îmbrăcămintea.
6. Toate probele de sânge trebuie considerate potențial infecțioase și trebuie manipulate cu grijă (în special: purtarea
de mănuși de protecție, halate și ochelari de protecție).
7. Eprubetele și materialele de unică folosință utilizate pentru manipulare trebuie eliminate în recipiente ad-hoc
destinate incinerării.